研究背景及目的:盡管有了早期篩查方法和疫苗接種,宮頸癌仍然有較高的發(fā)病率。據(jù)統(tǒng)計(jì),宮頸癌位居女性惡性腫瘤發(fā)病率的第4位,且年輕女性的發(fā)病率有逐年上升的趨勢,嚴(yán)重?fù)p害了女性的健康[1]。目前,高危人乳頭瘤病毒(HPV)的持續(xù)感染被廣泛認(rèn)為是宮頸癌發(fā)生的主要的因素。目前被定義的HPV病毒有150多種,根據(jù)它們感染的位置不同分為皮膚型和黏膜型,其中黏膜型又被分為高危型和低危型[2]。HPV16是宮頸普查樣本和宮頸癌組織中最常見和最危險(xiǎn)的類型,與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)[3-5]。HPVE6(以下簡稱:E6)和E7是促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞持續(xù)轉(zhuǎn)化的主要因素,其中,E6通過與多種細(xì)胞蛋白相互作用,進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、粘附、極性、增殖、凋亡、基因轉(zhuǎn)錄和染色體穩(wěn)定性,影響腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展[6-8]。腫瘤細(xì)胞的代謝異常在腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮了尤為重要的作用[9-10]。腫瘤代謝最大特點(diǎn)是有氧糖酵解,換句話說,在氧氣充足的條件下腫瘤細(xì)胞也最大程度的在細(xì)胞內(nèi)完成糖酵解,也被稱為Warburg效應(yīng)[11-13]。大部分葡萄糖分子通過葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),進(jìn)行糖酵解代謝。然而,也有一小部分通過糖酵解的中間步驟進(jìn)入磷酸戊糖...

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分: E6對磷酸戊糖途徑的調(diào)控作用及機(jī)制
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 質(zhì)粒、菌種、細(xì)胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞消化、傳代、計(jì)數(shù)、凍存
            2.2.2 慢病毒介導(dǎo)的E6基因敲除
            2.2.3 葡萄糖消耗量與ppp通量測定
            2.2.4 NADPH水平測定
            2.2.5 siRNA介導(dǎo)的G6PD基因沉默、Flag-E6介導(dǎo)的G6PD過表達(dá)
            2.2.6 E6過表達(dá)細(xì)胞系的構(gòu)建
            2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 E6敲除對氧化ppp通量的影響
        3.2 E6敲除對葡萄糖消耗量的影響
        3.3 E6敲除對NADPH的影響
        3.4 E6敲除對G6PD活性的影響
        3.5 E6過表達(dá)對G6PD活性的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分: E6與G6PD的相互作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 質(zhì)粒、菌種、細(xì)胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 Western Blot
            2.2.2 E6蛋白與G6PD蛋白免疫共沉淀
            2.2.3 GST pull down實(shí)驗(yàn)
            2.2.4 免疫熒光定位實(shí)驗(yàn)
    3 結(jié)果
        3.1 E6蛋白與G6PD蛋白在細(xì)胞內(nèi)形成復(fù)合物
        3.2 E6蛋白與G6PD蛋白在體外直接結(jié)合
        3.3 E6蛋白與G6PD蛋白共定位于細(xì)胞質(zhì)
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分: p53在E6調(diào)控G6PD中的作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 質(zhì)粒、菌種、細(xì)胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 E6過表達(dá)MEF細(xì)胞系構(gòu)建
            2.2.2 熒光定量 PCR(Real-time PCR)
    3 結(jié)果
        3.1 p53在E6調(diào)控G6PD活性中的作用(翻譯水平)
        3.2 p53在E6調(diào)控G6PD活性中的作用(轉(zhuǎn)錄水平)
    4 討論
    5 結(jié)論
第四部分: G6PD在E6促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖中的作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 質(zhì)粒、菌種、細(xì)胞系、動物
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 集落形成實(shí)驗(yàn)
            2.2.2 凋亡實(shí)驗(yàn)
            2.2.3 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
    3 結(jié)果
        3.1 G6PD基因沉默導(dǎo)致HPV E6陽性宮頸癌細(xì)胞增殖減少
        3.2 G6PD基因敲除導(dǎo)致HPV E6陽性宮頸癌細(xì)胞凋亡增加
        3.3 G6PD基因敲除導(dǎo)致HPV E6陽性宮頸癌細(xì)胞裸鼠體內(nèi)成瘤減慢
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價(jià)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號：3898495