目的體外誘導人臍帶華通氏膠間充質(zhì)干細胞(Wharton’s jelly-derived mesenchymal stem cells,WJ-MSCs)向子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞(endometrial stromal cells,ESCs)和腺上皮細胞(endometrial epithelial cells,EECs)定向分化,探討在分化過程中p38MAPK、ERK1/2以及cAMP-PKA信號通路的作用。方法(1)取足月剖宮產(chǎn)新生兒臍帶華通氏膠,采用植塊法原代培養(yǎng)WJ-MSCs。取全子宮切除術后新鮮子宮內(nèi)膜組織,采用酶消化法原代培養(yǎng)ESCs。(2)采用8-溴-環(huán)磷酸腺苷(8-Br-cAMP)、雌激素及生長因子TGF-β,EGF,PDGF-BB誘導P3代WJ-MSCs向子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞樣細胞分化,誘導21天后觀察細胞的形態(tài)學變化,流式細胞術鑒定細胞表面波形蛋白、角蛋白表達情況。(3)采用transwell共培養(yǎng)體系將WJ-MSCs與ESCs共培養(yǎng),并加入雌激素及生長因子,誘導WJ-MSCs向子宮內(nèi)膜腺上皮細胞樣細胞分化,誘導21天后觀察細胞的形態(tài)學變化,流式細胞術鑒定細胞表面波形蛋白、角蛋白...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1原代培養(yǎng)的人臍帶華通氏膠間充質(zhì)干細胞（×20）

第三章結(jié)果.1人臍帶華通氏膠間充質(zhì)干細胞原代培養(yǎng)及鑒定結(jié)果.1.1細胞形態(tài)觀察植塊法培養(yǎng)5天后，可見WJ-MSCs從組織塊周圍爬出，呈、紡錘形，體積較�。▓D1：A）；WJ-MSCs在培養(yǎng)10天左右合成片（圖1：B）；培養(yǎng)14天左右融合至80%（圖....

圖2流式細胞術檢測人臍帶華通氏膠間充質(zhì)干細胞表面標志物(A、B：細胞表面CD90、CD105表達陽性；C-G：細胞表面CD14、CD34、CD45、

南通大學碩士學位論文3.1.2流式細胞術鑒定P3代WJ-MSCs結(jié)果流式細胞術檢測P3代WJ-MSCs表面標記蛋白的結(jié)果顯示：CD90、CD105表達陽性率分別為：98.16%、96.57%（圖2：A、B）；CD14、CD34、CD45、CD79a、HLA-....

圖3原代培養(yǎng)的人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞（×20）

學碩士學位論文人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞原代培養(yǎng)及鑒定結(jié)果細胞形態(tài)觀察消化法培養(yǎng)的ESCs為單個細胞，加入完全培養(yǎng)基后30min24h后完全貼壁。初貼壁的ESCs為三角形，分布較散亂，居中，細胞質(zhì)薄而透明（圖3）。3d后細胞開始加速生長ESCs呈梭形，并逐漸融合。

圖4流式細胞術檢測原代培養(yǎng)的人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞表面標志物（A：細胞表面波形蛋白表達陽性；B：細胞表面角蛋白表達陰性）

南通大學碩士學位論文3.2.2流式細胞術鑒定P2代ESCs結(jié)果在P2代ESCs懸液中分別加入帶熒光標記的波形蛋白（Vimentin角蛋白（cytokeratin）特異性抗體，流式細胞儀檢測結(jié)果顯示：ESC形蛋白陽性率為94.92%（圖4:A），角蛋白陰性率為....

本文編號：3896104