背景與目的:腫瘤細(xì)胞耐藥是臨床化療失敗的主要原因,微小RNA(microRNA,miRNA)在腫瘤細(xì)胞中的異常表達(dá)與耐藥關(guān)系密切。本研究旨在探討卵巢癌及乳腺癌細(xì)胞中hsa-miRNA27a和hsa-miRNA451的表達(dá)差異及其與耐藥的關(guān)系。方法:用濃度遞增法建立卵巢癌耐紫杉醇細(xì)胞系A(chǔ)2780/Taxol;頸環(huán)狀引物實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(stem-loop quantitative real-time PCR,stem-loop RT-PCR)檢測卵巢癌耐紫杉醇細(xì)胞A2780/Taxol和親本細(xì)胞A2780以及乳腺癌耐阿霉素細(xì)胞MCF-7/ADM和親本細(xì)胞MCF-7中hsa-miRNA27a和hsa-miRNA451的表達(dá);利用Lipofectamine^TM2000分別將成熟miRNA27a的模擬物、阻遏物及陰性對照(negative control,NC)RNA轉(zhuǎn)染A2780和A2780/Taxol細(xì)胞,將成熟miRNA451的模擬物及NC轉(zhuǎn)染MCF-7/ADM細(xì)胞;RT-PCR技術(shù)檢測細(xì)胞MDR1 mRNA表達(dá);蛋白[質(zhì)]印跡法(Western blot)檢測...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 卵巢癌耐紫杉醇細(xì)胞株A2780/Taxol的建立
        1.2.3 頸環(huán)狀引物實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(stem-loop quantitative real-time PCR,stemloop RT-PCR)檢測腫瘤細(xì)胞中hsa-miRNA27a和hsa-miRNA451表達(dá)
        1.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        1.2.5 RT-PCR技術(shù)檢測細(xì)胞MDR1mRNA表達(dá)
        1.2.6 蛋白[質(zhì)]印跡法(Western blot)檢測細(xì)胞P-gp的表達(dá)
        1.2.7 MTT法檢測細(xì)胞增殖情況
    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 miRNA27a和miRNA451在卵巢癌和乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)
    2.2 卵巢癌和乳腺癌細(xì)胞中MDR1 mRNA的表達(dá)
        2.2.1 轉(zhuǎn)染后卵巢癌A2780和A2780/Taxol細(xì)胞MDR1 mRNA表達(dá)
        2.2.2 轉(zhuǎn)染前、后MCF-7/ADM細(xì)胞MDR1mRNA的表達(dá)
    2.3 卵巢癌細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞中P-gp表達(dá)的表達(dá)
        2.3.1 P-gp在卵巢癌A2780和A2780/Taxol細(xì)胞中的表達(dá)
        2.3.2 P-gp在乳腺癌MCF-7和MCF-7/ADM細(xì)胞中的表達(dá)
    2.4 轉(zhuǎn)染后卵巢癌和乳腺癌細(xì)胞增殖的改變
        2.4.1 轉(zhuǎn)染后卵巢癌A2780/Taxol和A2780細(xì)胞增殖的改變
        2.4.2 轉(zhuǎn)染后乳腺癌MCF-7/ADM細(xì)胞增殖的改變
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本文編號：3880009