背景與目的:腫瘤細胞耐藥是臨床化療失敗的主要原因,微小RNA(microRNA,miRNA)在腫瘤細胞中的異常表達與耐藥關系密切。本研究旨在探討卵巢癌及乳腺癌細胞中hsa-miRNA27a和hsa-miRNA451的表達差異及其與耐藥的關系。方法:用濃度遞增法建立卵巢癌耐紫杉醇細胞系A2780/Taxol;頸環(huán)狀引物實時定量聚合酶鏈反應(stem-loop quantitative real-time PCR,stem-loop RT-PCR)檢測卵巢癌耐紫杉醇細胞A2780/Taxol和親本細胞A2780以及乳腺癌耐阿霉素細胞MCF-7/ADM和親本細胞MCF-7中hsa-miRNA27a和hsa-miRNA451的表達;利用Lipofectamine^TM2000分別將成熟miRNA27a的模擬物、阻遏物及陰性對照(negative control,NC)RNA轉染A2780和A2780/Taxol細胞,將成熟miRNA451的模擬物及NC轉染MCF-7/ADM細胞;RT-PCR技術檢測細胞MDR1 mRNA表達;蛋白[質]印跡法(Western blot)檢測...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)
        1.2.2 卵巢癌耐紫杉醇細胞株A2780/Taxol的建立
        1.2.3 頸環(huán)狀引物實時定量聚合酶鏈反應(stem-loop quantitative real-time PCR,stemloop RT-PCR)檢測腫瘤細胞中hsa-miRNA27a和hsa-miRNA451表達
        1.2.4 細胞轉染
        1.2.5 RT-PCR技術檢測細胞MDR1mRNA表達
        1.2.6 蛋白[質]印跡法(Western blot)檢測細胞P-gp的表達
        1.2.7 MTT法檢測細胞增殖情況
    1.3 統(tǒng)計學處理
2 結果
    2.1 miRNA27a和miRNA451在卵巢癌和乳腺癌細胞中的表達
    2.2 卵巢癌和乳腺癌細胞中MDR1 mRNA的表達
        2.2.1 轉染后卵巢癌A2780和A2780/Taxol細胞MDR1 mRNA表達
        2.2.2 轉染前、后MCF-7/ADM細胞MDR1mRNA的表達
    2.3 卵巢癌細胞和乳腺癌細胞中P-gp表達的表達
        2.3.1 P-gp在卵巢癌A2780和A2780/Taxol細胞中的表達
        2.3.2 P-gp在乳腺癌MCF-7和MCF-7/ADM細胞中的表達
    2.4 轉染后卵巢癌和乳腺癌細胞增殖的改變
        2.4.1 轉染后卵巢癌A2780/Taxol和A2780細胞增殖的改變
        2.4.2 轉染后乳腺癌MCF-7/ADM細胞增殖的改變
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本文編號：3880009