本文關(guān)鍵詞：Huwe1在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：Huwe1 (HECT,UBA and WWE domain containingl),是一個(gè)含有HECT域的E3泛素連接酶,泛素連接酶是泛素化發(fā)生過程中必不可少的三個(gè)關(guān)鍵酶之一。泛素化是指在泛素激活酶E1、結(jié)合酶E2和泛素連接酶E3等一系列酶共同作用下,泛素分子對蛋白底物進(jìn)行特異的修飾,在蛋白降解、功能調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮重要作用。而Huwe1就是這么一種泛素連接酶。含Hect結(jié)構(gòu)域的泛素連接酶,則被認(rèn)為是癌癥發(fā)生發(fā)展過程中的重要調(diào)節(jié)因子。作為含Hect結(jié)構(gòu)域E3泛素連接酶的Huwe1也一直被認(rèn)為是癌癥發(fā)生的重要調(diào)節(jié)因子,但是人們對其在增殖、凋亡、癌癥發(fā)生發(fā)展中所起的作用一直有不同看法：因?yàn)镠uwe1編碼的蛋白巨大(500KD),導(dǎo)致長期以來一直未能完全克隆全長基因,編碼蛋白的功能也無法確定。直到2005年兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室同時(shí)克隆出Huwe1基因的全長,確認(rèn)其為E3泛素連接酶,并發(fā)現(xiàn)了其作用的底物。但是兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室發(fā)表的文章中對其在增殖、凋亡、癌癥發(fā)生中所起的作用就有了不同看法。后來陸續(xù)的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其作用底物包括Mcl-1、p53、N-MYC、C-MYC、組蛋白、CDC6等,這其中既有抑癌基因又有癌基因。并且在人癌癥標(biāo)本中,研究結(jié)果也存在很大爭議：胃癌、前列腺癌、乳腺癌等組織中,Huwe1表達(dá)升高,提示Huwe1可能促進(jìn)癌癥發(fā)生；而在畸胎瘤細(xì)胞表達(dá)明顯偏低,膠質(zhì)母細(xì)胞瘤系中Huwe1發(fā)生突變,提示Huwe1可能是抑癌基因。越來越多的研究沒有使得Huwe1具體功能得到合理闡述,反而使問題更加撲朔迷離。因此Huwel的具體功能有待進(jìn)一步研究,闡述這一問題將對相關(guān)癌癥發(fā)病機(jī)制等有重要意義。卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)癌癥惡性化及死亡率很高的疾病,但是關(guān)于Huwel在卵巢癌中功能的研究卻很少,這使得卵巢癌成為研究Huwe1在癌癥發(fā)生、發(fā)展中作用的理想對象。研究表明約90%的卵巢癌起源于覆蓋卵巢的上皮細(xì)胞,卵巢癌中最常見的遺傳學(xué)變異是c-Myc、K-ras基因擴(kuò)增以及P53突變等。鑒于此我們利用表達(dá)K-ras, c-Myc和沉默p53基因的慢病毒注射至Huwe1 (flop)小鼠的卵巢囊中,試圖模擬卵巢癌發(fā)生的過程。但是Huwe1 (flop)小鼠的卵巢囊存在缺陷型裂口,會導(dǎo)致病毒液泄露。因此我們改變策略,通過分離、病毒感染Huwe1 (flop)小鼠卵巢上皮細(xì)胞(Mose細(xì)胞),使其惡性轉(zhuǎn)化,建立Huw el敲除的惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞株Mose-cre (Huwe1-)和Huwel未敲除的惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞株Mose-creER(Huwel+),模擬卵巢癌發(fā)生發(fā)展的過程。兩種細(xì)胞株建立后,我們對兩種細(xì)胞株細(xì)胞的低血清耐受能力、細(xì)胞遷移能力、細(xì)胞侵襲能力以及克隆形成能力等一系列腫瘤相關(guān)表型之間的差別進(jìn)行比較,試圖分析在小鼠卵巢上皮細(xì)胞發(fā)生發(fā)展中Huwel發(fā)揮的具體作用。在確定Huwel在惡性轉(zhuǎn)化小鼠卵巢上皮細(xì)胞發(fā)揮具體功能以后,我們對Huw el在惡性轉(zhuǎn)化小鼠卵巢上皮細(xì)胞發(fā)揮作用的可能機(jī)制進(jìn)行了探討。通過在惡性轉(zhuǎn)化小鼠卵巢上皮細(xì)胞中Huwel發(fā)揮的功能與機(jī)制模擬卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中Huwel的作用。
【關(guān)鍵詞】：Huwe1 卵巢上皮細(xì)胞 惡性轉(zhuǎn)化 卵巢癌發(fā)生發(fā)展
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 縮略語9-12
• 第一章 緒論(Introduction)12-22
• 1.1 選題背景和意義12-13
• 1.2 文獻(xiàn)綜述及研究現(xiàn)狀13-19
• 1.2.1 腫瘤、癌基因、抑癌基因13
• 1.2.2 卵巢癌相關(guān)的原癌基因、抑癌基因13-15
• 1.2.3 基因治療15-16
• 1.2.4 卵巢癌的基因治療16-18
• 1.2.5 Huwel與卵巢癌18-19
• 1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)、試驗(yàn)內(nèi)容19-22
• 第二章 材料與方法(Materials and Methods)22-48
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料試劑22-26
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器22-23
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑23-25
• 2.1.3 本研究中常用試劑的配制25-26
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法26-48
• 2.2.1 小鼠卵巢上皮細(xì)胞的分離26-27
• 2.2.2 小鼠卵巢上皮細(xì)胞的培養(yǎng)27-28
• 2.2.3 小鼠卵巢上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化載體構(gòu)建28-36
• 2.2.4 慢病毒包裝和濃縮,慢病毒滴度檢測36-37
• 2.2.5 小鼠卵巢上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化37
• 2.2.6 病毒感染情況檢測37-40
• 2.2.7 細(xì)胞樣本總RNA提取40-41
• 2.2.8 Transwell細(xì)胞小室遷移試驗(yàn)41
• 2.2.9 Transwell細(xì)胞小室侵襲試驗(yàn)41-42
• 2.2.10 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)42
• 2.2.11 流式細(xì)胞術(shù)42-43
• 2.2.12 實(shí)時(shí)定量熒光PCR(Realtime PCR)43-45
• 2.2.13 軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)45-46
• 2.2.14 熒光素酶報(bào)告試驗(yàn)(Luciferase Reporter Assay)46-48
• 第三章 結(jié)果(Results)48-62
• 3.1 小鼠卵巢上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞系的建立48-52
• 3.1.1 分離小鼠卵巢上皮細(xì)胞49
• 3.1.2 載體構(gòu)建及病毒包裝49-50
• 3.1.3 病毒感染細(xì)胞50-51
• 3.1.4 細(xì)胞形態(tài)觀察51-52
• 3.2 Huwe1敲除對惡性轉(zhuǎn)化小鼠卵巢上皮細(xì)胞的影響52-57
• 3.2.1 Huwe1敲除對惡性轉(zhuǎn)化小鼠卵巢上皮細(xì)胞低血清耐受的影響52-54
• 3.2.2 Huwe1敲除對惡性轉(zhuǎn)化小鼠卵巢上皮細(xì)胞遷移侵襲能力影響54-56
• 3.2.3 Huwe1敲除對惡性轉(zhuǎn)化小鼠卵巢上皮細(xì)胞克隆形成能力影響56-57
• 3.3 Huwel在惡性轉(zhuǎn)化小鼠卵巢上皮細(xì)胞中作用機(jī)制的研究57-62
• 3.3.1 轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)(RNAseq)結(jié)果57-59
• 3.3.2 Real-timePCR驗(yàn)證結(jié)果符合RNAseq結(jié)果59
• 3.3.3 雙熒光素酶系統(tǒng)檢測Wnt信號通路59-62
• 第四章 討論(Discussions)62-64
• 參考文獻(xiàn)(References)64-68
• 附錄68-74
• 致謝74-76
• 在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與取得的其他研究成果76

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊念念;嚴(yán)亞瓊;龔潔;張思維;鄭榮壽;陳萬青;;中國2003～2007年卵巢癌發(fā)病與死亡分析[J];中國腫瘤;2012年06期

  本文關(guān)鍵詞：Huwe1在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：387406