目的:研究過表達孕激素受體B,可增強子宮內(nèi)膜癌細胞Ishikawa和KLE對孕激素類藥物醋酸甲羥孕酮的敏感性,為臨床子宮內(nèi)膜癌孕激素保守治療提供理論依據(jù)。方法:先提取子宮內(nèi)膜癌細胞Ishikawa的RNA,逆轉(zhuǎn)錄為c DNA作為模板,設計PRB的CDS區(qū)全長的特異性引物并對目的片段進行擴增,然后將目的片段產(chǎn)物克隆到pcDNA3.1(+)質(zhì)粒載體中,再將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到DH5α感受態(tài)細胞,在預先制備好的LB選擇性固體培養(yǎng)基(含氨芐)中進行培養(yǎng),挑陽性克隆經(jīng)300 rpm,培養(yǎng)12-16 h后,經(jīng)雙酶切及測序鑒定,構建pcDNA3.1(+)-PRB重組質(zhì)粒載體。體外培養(yǎng)子宮內(nèi)膜癌細胞Ishikawa和KLE,將構建好的pcDNA3.1(+)-PRB重組質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染至Ishikawa和KLE細胞中,運用Real-time PCR、Western blot技術檢測轉(zhuǎn)染后Ishikawa和KLE中PRB m RNA和蛋白的表達變化,來確定是否構成PRB過表達的細胞系。然后用醋酸甲羥孕酮來處理轉(zhuǎn)染前后子宮內(nèi)膜癌細胞Ishikawa和KLE,用CCK-8法、劃痕實驗和單克隆形成實驗來檢測細胞增殖活性和...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
第2章 實驗材料
    2.1 主要儀器
    2.2 主要試劑
    2.3 相關試劑盒
    2.4 相關生物信息學分析網(wǎng)站與軟件
第3章 實驗方法
    3.1 主要溶液的配制
    3.2 引物設計
    3.3 細胞培養(yǎng)
    3.4 pcDNA3.1(+)-PRB重組載體構建
    3.5 細胞轉(zhuǎn)染
    3.6 Real-time PCR檢測轉(zhuǎn)染后PRB mRNA的表達
    3.7 Western Blot檢測轉(zhuǎn)染后PRB蛋白的表達
    3.8 CCK-8 法檢測MPA對轉(zhuǎn)染前后Ishikawa和 KLE細胞系增殖的影響
    3.9 單克隆形成實驗檢測MPA對轉(zhuǎn)染前后Ishikawa和 KLE細胞系增殖的影響
    3.10 劃痕實驗檢測MPA對轉(zhuǎn)染前后Ishikawa和 KLE細胞系遷移的影響
    3.11 統(tǒng)計分析
第4章 實驗結(jié)果
    4.1 細胞RNA的提取
    4.2 pcDNA3.1(+)-PRB重組載體構建
    4.3 Real-time PCR檢測轉(zhuǎn)染后PRB mRNA的表達情況
    4.4 Western Blot檢測轉(zhuǎn)染后PRB蛋白的表達情況
    4.5 CCK-8法檢測細胞增殖能力
    4.6 單克隆形成實驗檢測細胞增殖能力
    4.7 劃痕實驗檢測細胞遷移能力
第5章 實驗討論
第6章 實驗結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
研究生期間科研成果
致謝



本文編號：3845137