目的:宮頸癌患者死亡的主要原因是腫瘤的復發(fā)、未控和轉移,且約有35%的患者會發(fā)生復發(fā)/未控。復發(fā)/未控的治療難點在于:受之前治療手段的影響(手術、放療或化療),后續(xù)治療方法常常受到限制,預后很差。血管新生是宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的重要步驟,目前抗血管新生藥物聯(lián)合化療已成為復發(fā)/未控性宮頸癌的首選治療方案。但現(xiàn)有的抗血管新生藥物仍存在很多局限,在降低副反應、降低費用、提高療效等方面仍有很大的提升空間。臨床上迫切需要尋找經(jīng)濟有效、低毒安全的新型抗血管新生藥物,從植物提取物中研發(fā)抗血管新生藥物是一個極富吸引力的方向。7-二氟亞甲基-5,4’-二甲烷氧基異黃酮(7-difluoromethoxy-5,4’-dimethoxygenistein,DFMG)是本課題組前期從植物中提取的新化學實體,已證實能通過調控Toll樣受體4(Tolllike receptor 4,TLR4)抑制動脈粥樣硬化過程中的血管新生。有研究表明宮頸癌細胞中TLR4呈高表達狀態(tài),且與VEGF-A之間存在明顯正相關性,研究猜想DFMG是否可通過調控TLR4/VEGF-A路徑抑制宮頸癌血管新生。本課題以宮頸癌Siha細胞和靜脈內皮...

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一部分 DFMG對宮頸癌血管新生的影響
    1.1 實驗材料
        1.1.1 細胞系
        1.1.2 藥品和試劑
        1.1.3 儀器和設備
        1.1.4 試劑的配制
        1.1.5 抗體
    1.2 實驗方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)
        1.2.2 CCK-8試劑盒檢測細胞活力
        1.2.3 Matrigel基質膠小管形成實驗
        1.2.4 細胞劃痕實驗
        1.2.5 雞胚絨毛尿囊膜(Chick embryo chorioallantoic membrane,CAM)血管形成實驗
        1.2.6 酶聯(lián)免疫吸附劑測定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA)
        1.2.7 蛋白質免疫印跡(Western Blot,WB)
        1.2.8 統(tǒng)計學分析
    1.3 實驗結果
        1.3.1 不同濃度的DFMG對細胞活力的影響
        1.3.2 宮頸癌Siha細胞上清液對Matrigel基質膠小管形成的影響
        1.3.3 宮頸癌Siha細胞上清液對HUVE-12 細胞遷移能力的影響
        1.3.4 宮頸癌Siha細胞上清液對CAM膜血管形成的影響
        1.3.5 DFMG對宮頸癌Siha細胞VEGF-A蛋白分泌的影響
        1.3.6 DFMG對宮頸癌Siha細胞VEGF-A蛋白表達的影響
    1.4 討論
    1.5 小結
第二部分 TLR4/VEGF-A路徑對宮頸癌血管新生的影響
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞系
        2.1.2 藥品和試劑
        2.1.3 儀器設備
        2.1.4 試劑的配置
        2.1.5 慢病毒載體與小干擾RNA靶序列
        2.1.6 引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 TLR4 基因過表達慢病毒穩(wěn)定轉染宮頸癌Siha細胞
        2.2.3 TLR4 基因小干擾RNA(Si RNA)瞬時轉染宮頸癌Siha細胞
        2.2.4 蛋白質免疫印跡(Western Blot,WB)
        2.2.5 實時定量聚合酶鏈反應(Quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)
        2.2.6 實驗分組
        2.2.7 Matrigel基質膠小管形成實驗
        2.2.8 細胞劃痕實驗
        2.2.9 雞胚絨毛尿囊膜(Chick embryo chorioallantoic membrane,CAM)血管形成實驗
        2.2.10 統(tǒng)計學方法
    2.3 實驗結果
        2.3.1 TLR4 基因過表達慢病毒和小干擾RNA(Si RNA)分別轉染宮頸癌Siha細胞的驗證
        2.3.2 干預TLR4/VEGF-A后宮頸癌Siha細胞上清液對Matrigel基質膠小管形成的影響
        2.3.3 干預TLR4/VEGF-A后宮頸癌Siha細胞上清液對HUVE-12細胞遷移的影響
        2.3.4 干預TLR4/VEGF-A后宮頸癌Siha細胞上清液對CAM膜血管形成的影響
    2.4 討論
    2.5 小結
第三部分 DFMG干預TLRE/VEGF-A對宮頸癌血管新生的影響
    3.1 實驗材料
        3.1.1 細胞系
        3.1.2 藥品和試劑
        3.1.3 儀器和設備
        3.1.4 試劑的配置
        3.1.5 抗體
        3.1.6 引物
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細胞培養(yǎng)
        3.2.2 實驗分組
        3.2.3 Matrigel基質膠小管形成實驗
        3.2.4 細胞劃痕實驗
        3.2.5 雞胚絨毛尿囊膜(Chick embryo chorioallantoic membrane,CAM)血管形成實驗
        3.2.6 酶聯(lián)免疫吸附劑測定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA)
        3.2.7 蛋白質免疫印跡(Western Blot,WB)
        3.2.8 實時定量聚合酶鏈反應(Quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)
    3.3 實驗結果
        3.3.1 DFMG干預TLR4/VEGF-A后宮頸癌Siha細胞上清液對Matrigel基質膠小管形成的影響
        3.3.2 DFMG干預TLR4/VEGF-A后宮頸癌Siha細胞上清液對HUEV-12細胞遷移的影響
        3.3.3 DFMG干預TLR4/VEGF-A后宮頸癌Siha細胞上清液對CAM膜血管形成的影響
        3.3.4 DFMG干預TLR4/VEGF-A對宮頸癌Siha細胞VEGF-A蛋白分泌的影響
        3.3.5 DFMG干預TLR4/VEGF-A對宮頸癌Siha細胞TLR4、VEGF-A蛋白表達的影響
        3.3.6 DFMG干預TLR4/VEGF-A對宮頸癌Siha細胞TLR4、VEGF-A m RNA表達的影響
    3.4 討論
    3.5 小結
結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
附錄
攻讀碩士學位期間主要成果
致謝



本文編號：3819939