本文關鍵詞：VVC患者臨床分離白念珠菌鋅簇轉(zhuǎn)錄因子Cap1、Mrr1對外排泵基因MDR1的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：外陰陰道念珠菌病(Vulvovaginal Candida,VVC)是一種臨床上主要累及外陰部和陰道內(nèi)的,一般是由念珠菌所感染機體導致的疾病,它的癥狀主要為生殖器部位的瘙癢,患者的白帶增多表現(xiàn)為豆腐或凝乳狀,日常生活中大約有75%的女性在一生中大約會罹患一次VVC。VVC在實際臨床中一般容易治療,但它有較高的發(fā)病率,同時治療后數(shù)月或數(shù)年在女性身體免疫力低下時又會復發(fā),所以,它對世界上各個國家和地區(qū)女性的身心健康構(gòu)成了巨大的威脅。當前,各地區(qū)醫(yī)院在臨床上治療VVC主要選用的藥物大部分是唑類,首選氟康唑(FCA),由于VVC患者長期不合理的用藥和患者自身免疫功能的低下等諸多原因?qū)е铝四瓦蝾愃幬锞甑某霈F(xiàn),且耐藥現(xiàn)象日趨嚴重。所以,目前對于研究VVC中白念珠菌對唑類藥物的耐藥非常緊迫,這一研究結(jié)果對于在臨床上指導VVC的治療具有重要意義。目的:1.了解當?shù)豓VC患者陰道分泌物中各種類型念珠菌的主要分布情況和所分離出來的菌株對常用唑類藥物的敏感性;2.探討在本地區(qū)VVC患者中白念珠菌中鋅簇轉(zhuǎn)錄因子Cap1、Mrr1和外排泵基因MDR1的表達水平與臨床上經(jīng)常使用的藥物氟康唑的耐藥關系,同時分析三種因子之間有無協(xié)同耐藥關系。方法:收集從2014年3月到2014年11月,山西醫(yī)科大學第二醫(yī)院皮膚性病科,疑似VVC患者的潔凈陰道分泌物標本總共約256例,下一步通過KOH的顯微鏡的檢查、沙氏培養(yǎng)基、API20CAUX陽性標本的鑒定系統(tǒng),對所得臨床標本進行真菌的直接鏡檢和培養(yǎng),一共獲得了158株念珠菌。運用ATB Fungus3酵母檢測系統(tǒng)測量所分離出的念珠菌對常見5種唑類藥物的敏感性。對上述在實驗室最初將從白念珠菌分離鑒定出來的68株白念珠菌分別同時提取它們各自基因組的DNA,采用更為精確的分子生物學PCR方法來進一步檢測以上菌株是否確定為白念珠菌。隨機選取上述實驗得到的白念珠菌50株,分別得到對FCA敏感的和對FCA耐藥的25株。下一步主要是提取每個菌株的總RNA,進行嚴格的逆轉(zhuǎn)錄進而合成c DNA,FQ-RT-PCR方法得到Mrr1、Cap1、MDR1等基因的具體表達量,同時分析它們的表達水平與FCA的耐藥關系。結(jié)果:1.一共收集了VVC患者潔凈的陰道分泌物256份,真菌培養(yǎng)結(jié)果是陽性的總共有158例,陽性率為61.7%。其中白念珠菌具體是68株(43.0%),熱帶念珠菌具體是31株(19.6%),光滑念珠菌具體是22株(13.9%),近平滑念珠菌具體是8株(5.1%),克柔念珠菌具體是5株(3.2%),其它的菌主要是24株(15.2%)。2.對1中的68株各種方法鑒定后的白念珠菌藥物的敏感性的結(jié)果為:白念珠菌對5-FC、AMB都很敏感,對ITR、FCA和VRC的耐藥性分別為36.7%、38.71%和42.65%。存在共同耐藥現(xiàn)象。3.檢測各個基因的m RNA表達水平在白念珠菌耐FCA耐藥菌株和敏感菌株中的Mrr1、Cap1、MDR1的表達量。白念珠菌的耐藥組中的Cap1、MDR1分子的表達比敏感組(P0.05)的表達高得多,所得結(jié)果:在耐藥組中Cap1基因的表達量為敏感組基因的表達量的5.12倍,耐藥組Mrr1基因的表達量是敏感組基因的表達量的1.67倍,Cap1與MDR1呈明顯的正相關,而Mrr1與MDR1沒有統(tǒng)計學上表達的差異。結(jié)論:1.白念珠菌株仍為本地區(qū)VVC感染的主要致病真菌,對氟康唑敏感株較多,可作為臨床治療VVC一線用藥。2.白念珠菌中Cap1與MDR1的m RNA表達量都較高,它們在在唑類藥物耐藥中發(fā)揮著巨大的的主要作用。3.MDR1的表達量增高可能使唑類藥物產(chǎn)生耐藥,Cap1的高表達可以直接導致唑類藥物另一方面可通過調(diào)控外排泵基因MDR1的m RNA表達水平,使MDR1基因的m RNA表達水平有了很明顯的上升,進而使它們發(fā)揮耐藥。4.Mrr1的明表達水平在唑類中發(fā)揮不明顯的耐藥作用。
【關鍵詞】：外陰陰道念珠菌病 白念珠菌 鋅簇轉(zhuǎn)錄因子 外排泵基因 高表達
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R711.3
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 常用縮寫詞中英文對照表12-13
• 前言13-16
• 第一部分 臨床菌株分離、鑒定與藥物敏感性分析16-29
• 1 實驗材料16-18
• 1.1 菌株來源16
• 1.2 主要儀器16
• 1.3 主要試劑及來源16-17
• 1.4 主要試劑的制備17-18
• 2 實驗方法18-22
• 2.1 真菌鏡檢18
• 2.2 真菌分離的培養(yǎng)及菌種鑒定18-19
• 2.3 藥物的敏感性試驗19-20
• 2.4 白念珠菌菌株DNA提取20-22
• 3 實驗結(jié)果22-26
• 3.1 真菌鏡檢、培養(yǎng)結(jié)果22
• 3.2 CHROMagar顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)果22-23
• 3.3 API 20C AUX酵母菌鑒定試劑條鑒定結(jié)果23
• 3.4 體外藥敏試驗結(jié)果23-25
• 3.5 真菌通用引物ITS4/ITS86的擴增結(jié)果25-26
• 4 討論26-29
• 第二部分 白念珠菌鋅簇轉(zhuǎn)錄因子及外排泵基因的表達與耐藥的關系29-41
• 1 實驗材料29-30
• 1.1 實驗菌株29
• 1.2主要儀器29
• 1.3主要試劑29
• 1.4 主要試劑的制備29-30
• 2 實驗方法30-34
• 2.1 菌株選擇30
• 2.2 菌株RNA的提取30-31
• 2.3 逆轉(zhuǎn)錄（c DNA的合成）31
• 2.4引物的設計及合成31-32
• 2.5 實時熒光定量PCR反應（RT-PCR)及基因擴增32-34
• 3 實驗結(jié)果34-38
• 3.1 RT-PCR反應的特異性擴增34-35
• 3.2 鋅簇轉(zhuǎn)錄因子Cap1在耐藥組與敏感組中m RNA表達水平35-36
• 3.3 鋅簇轉(zhuǎn)錄因子Mrr1在耐藥組與敏感組中m RNA的表達水平36
• 3.4 外排泵基因MDR1在耐藥組與敏感組中m RNA的表達水平36
• 3.5 Cap1、Mrr1及外排泵MDR1基因m RNA表達量的相關性分析36-38
• 4 討論38-40
• 5 結(jié)論40-41
• 參考文獻41-45
• 綜述45-53
• 參考文獻50-53
• 致謝53-54
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果54-55
• 個人簡歷55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 孟曉紅;郭紅衛(wèi);;復發(fā)性念珠菌陰道炎患者念珠菌菌落計數(shù)及INF-γ、IL-4水平的檢測[J];廣東醫(yī)學院學報;2012年04期

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3 吳穎;劉偉;萬哲;李若瑜;;氟康唑耐藥的白念珠菌對唑類藥物交叉耐藥實驗[J];中國皮膚性病學雜志;2009年03期

4 周秀梅;池鴻斐;陳麗瑋;金秀花;;外陰陰道假絲酵母菌病臨床特征和抗真菌藥物敏感性研究[J];中國性科學;2013年05期

  本文關鍵詞：VVC患者臨床分離白念珠菌鋅簇轉(zhuǎn)錄因子Cap1、Mrr1對外排泵基因MDR1的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：381613