目的探討胰酶法分離大鼠卵巢顆粒細胞的優(yōu)勢。方法取3～4周齡雌性SD大鼠的卵巢,分別采用機械法和胰酶法分離顆粒細胞并進行培養(yǎng)。機械法:于40倍解剖顯微鏡下用針頭刺破卵巢成熟的卵泡,將含有卵巢剩余組織及卵泡液的培養(yǎng)液用200目濾網(wǎng)過濾;胰酶法:用無菌眼科剪將卵巢剪成小于2 mm³的小碎塊,然后加入0.25%胰酶,室溫消化1 h后,將含有卵巢碎塊的消化液用200目濾網(wǎng)過濾。比較這2種分離方法獲得的細胞數(shù)量、細胞活力,及雌二醇和孕酮的分泌情況。結果機械法和胰酶法這2種方法分離的原代大鼠卵巢顆粒細胞存活率均>90%。將細胞培養(yǎng)1～9 d,除24 h外,其余各時間點胰酶法分離的細胞增殖率均高于機械法;胰酶法細胞增殖率峰值出現(xiàn)時間早于機械法24 h,并且胰酶法分離的細胞最大增殖率[72 h:(210.09±0.95)%]高于機械法[96 h:(180.50±0.74)%],差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。胰酶法分離的細胞激素的最大分泌量、每日平均分泌量及分泌總量均高于機械法,差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。結論胰酶法分離的大鼠卵巢顆粒細胞在細胞活力和激...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實驗動物
    1.2 實驗藥物、試劑與儀器
    1.3 卵巢顆粒細胞的分離與培養(yǎng)
        1.3.1 機械法
        1.3.2 胰酶法
    1.4 大鼠卵巢顆粒細胞的鑒定
        1.4.1 H-E染色觀察顆粒細胞的形態(tài)
        1.4.2 免疫細胞化學染色觀察顆粒細胞的FSHR表達
    1.5 CCK-8法檢測大鼠卵巢顆粒細胞增殖活力
    1.6 ELISA法檢測大鼠卵巢顆粒細胞激素分泌
    1.7 統(tǒng)計學處理
2 結 果
    2.1 大鼠卵巢顆粒細胞的鑒定
    2.2 2種方法分離的大鼠卵巢顆粒細胞的生長對比
    2.3 2種方法分離的大鼠卵巢顆粒細胞的激素分泌對比
3 討 論



本文編號：3814699