目的探討胰酶法分離大鼠卵巢顆粒細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)。方法取3～4周齡雌性SD大鼠的卵巢,分別采用機(jī)械法和胰酶法分離顆粒細(xì)胞并進(jìn)行培養(yǎng)。機(jī)械法:于40倍解剖顯微鏡下用針頭刺破卵巢成熟的卵泡,將含有卵巢剩余組織及卵泡液的培養(yǎng)液用200目濾網(wǎng)過(guò)濾;胰酶法:用無(wú)菌眼科剪將卵巢剪成小于2 mm³的小碎塊,然后加入0.25%胰酶,室溫消化1 h后,將含有卵巢碎塊的消化液用200目濾網(wǎng)過(guò)濾。比較這2種分離方法獲得的細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞活力,及雌二醇和孕酮的分泌情況。結(jié)果機(jī)械法和胰酶法這2種方法分離的原代大鼠卵巢顆粒細(xì)胞存活率均>90%。將細(xì)胞培養(yǎng)1～9 d,除24 h外,其余各時(shí)間點(diǎn)胰酶法分離的細(xì)胞增殖率均高于機(jī)械法;胰酶法細(xì)胞增殖率峰值出現(xiàn)時(shí)間早于機(jī)械法24 h,并且胰酶法分離的細(xì)胞最大增殖率[72 h:(210.09±0.95)%]高于機(jī)械法[96 h:(180.50±0.74)%],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。胰酶法分離的細(xì)胞激素的最大分泌量、每日平均分泌量及分泌總量均高于機(jī)械法,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。結(jié)論胰酶法分離的大鼠卵巢顆粒細(xì)胞在細(xì)胞活力和激...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 實(shí)驗(yàn)藥物、試劑與儀器
    1.3 卵巢顆粒細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        1.3.1 機(jī)械法
        1.3.2 胰酶法
    1.4 大鼠卵巢顆粒細(xì)胞的鑒定
        1.4.1 H-E染色觀察顆粒細(xì)胞的形態(tài)
        1.4.2 免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察顆粒細(xì)胞的FSHR表達(dá)
    1.5 CCK-8法檢測(cè)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞增殖活力
    1.6 ELISA法檢測(cè)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞激素分泌
    1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié) 果
    2.1 大鼠卵巢顆粒細(xì)胞的鑒定
    2.2 2種方法分離的大鼠卵巢顆粒細(xì)胞的生長(zhǎng)對(duì)比
    2.3 2種方法分離的大鼠卵巢顆粒細(xì)胞的激素分泌對(duì)比
3 討 論



本文編號(hào)：3814699