發(fā)布時(shí)間：2023-04-22 13:02

　　背景:多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome,PCOS),是一種生殖內(nèi)分泌及代謝異常性疾病,是育齡婦女不孕的重要原因之一。雄激素升高是多囊卵巢綜合征眾多病理變化的重要形成原因,CYP19A1轉(zhuǎn)錄翻譯的芳香化酶是催化雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素過(guò)程的限速酶。間充質(zhì)干細(xì)胞目前被應(yīng)用于多種疾病的治療,其中經(jīng)血間充質(zhì)干細(xì)胞(menstrual blood-derived mesenchymal stem cells,MenSCs)是新發(fā)現(xiàn)的一種,尚無(wú)應(yīng)用于多囊卵巢綜合征治療的研究報(bào)告。目的:探討經(jīng)血間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)多囊卵巢綜合征大鼠卵巢CYP19A1基因表達(dá)的影響方法:隨機(jī)選取60只6周雌性大鼠,40只注射胰島素+絨毛膜促性腺激素,造模多囊卵巢綜合征大鼠,20只設(shè)置為對(duì)照組。通過(guò)檢測(cè)血清睪酮濃度及陰道脫落細(xì)胞變化,來(lái)觀察大鼠發(fā)情周期變化。PCOS組取4只大鼠,對(duì)照組取2只大鼠,處死,取卵巢,一側(cè)卵巢切片,用于觀察病理變化,另一側(cè)卵巢的一半用于RNA提取,另一半備提取蛋白,用以檢測(cè)多囊卵巢造模成功情況。培養(yǎng)人經(jīng)血間充質(zhì)干細(xì)胞,對(duì)其細(xì)胞表面抗原分子采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行鑒定,并進(jìn)行細(xì)胞...

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1.引言
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 人經(jīng)血間充質(zhì)干細(xì)胞（MenSCs）
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 經(jīng)血干細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定和分化
        2.2.2 PCOS大鼠模型的建立
        2.2.3 細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)染
        2.2.4 大鼠眼眶靜脈取血
        2.2.5 石蠟包埋與石蠟切片
        2.2.6 石蠟切片HE染色
        2.2.7 石蠟切片免疫熒光染色
        2.2.8 大鼠陰道脫落細(xì)胞涂片
        2.2.9 大鼠經(jīng)血間充質(zhì)干細(xì)胞移植
        2.2.10 間充質(zhì)干細(xì)胞在大鼠體內(nèi)的定位
        2.2.11 大鼠卵巢RNA的提取
        2.2.12 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.2.13 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.14 統(tǒng)計(jì)分析
3.結(jié)果
    3.1 動(dòng)物模型評(píng)價(jià)
        3.1.1 多囊卵巢綜合征組大鼠的發(fā)情周期紊亂
        3.1.2 造模后大鼠血清雄激素濃度檢測(cè)結(jié)果
    3.2 實(shí)驗(yàn)所用經(jīng)血間充質(zhì)干細(xì)胞鑒定
        3.2.1 經(jīng)血間充質(zhì)干細(xì)胞分化
        3.2.2 流式細(xì)胞儀鑒定經(jīng)血間充質(zhì)干細(xì)胞表面分子
    3.3 經(jīng)血間充質(zhì)干細(xì)胞移植后大鼠體內(nèi)定位
        3.3.1 小動(dòng)物成像系統(tǒng)，追蹤熒光素酶體內(nèi)位置
        3.3.2 熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白大鼠卵巢定位
    3.4 大鼠卵巢石蠟切片HE染色后病理觀察
        3.4.1 治療前PCOS大鼠與對(duì)照組大鼠卵巢病理切片差異
        3.4.2 PCOS組大鼠經(jīng)血間充質(zhì)干細(xì)胞治療后與DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)照治療后卵巢病理切片差異
    3.5 干細(xì)胞治療后大鼠血清雄激素濃度的變化
    3.6 CYP19A1在大鼠卵巢中的表達(dá)
        3.6.1 PCOS-MSCs組與PCOS-DMEM組比較
        3.6.2 NC-DMEM組與PCOS-MenSCs組比較
        3.6.3 PCOS-MenSCs組與NC-MenSCs組比較
        3.6.4 PCOS-DMEM組與NC-DMEM組比較
4.討論
    4.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的選擇
    4.2 經(jīng)血間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定
    4.3 大鼠尾靜脈注射MenSCs移植
    4.4 經(jīng)血間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)CPY19A1在大鼠卵巢中表達(dá)的影響
5 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
附錄或縮略詞表
致謝



本文編號(hào)：3797689