目的觀察Wnt3a對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響,并探討其是否通過Dishevelled-2(Dvl-2)激活PI3KAkt-GSK3β通路起作用。方法取子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞Ishikaw,MTT法確定Wnt3a作用于細(xì)胞的安全濃度<500 ng/mL;以0、50、100、200、400 ng/mL Wnt3a處理后,用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)測算細(xì)胞遷移距離; 400 ng/mL Wnt3a處理細(xì)胞0、12、24、48 h后,Western blotting法檢測細(xì)胞中Dvl-2、PI3K、Akt和GSK3β的磷酸化水平;轉(zhuǎn)染Dvl-2 siRNA質(zhì)粒敲低Dvl-2表達(dá)后,觀察Wnt3a對細(xì)胞遷移的影響;分別用LY294002(PI3K抑制劑)、CCT128930(Akt抑制劑)預(yù)處理細(xì)胞后,用Western blotting法檢測Wnt3a誘導(dǎo)的Akt、GSK3β磷酸化水平變化;敲低Dvl-2表達(dá)后,用Western blotting法檢測Wnt3a誘導(dǎo)的PI3K磷酸化水平變化;分別用LY294002、CCT128930、AR-A014418(GSK3β抑制劑)預(yù)處理細(xì)胞,或敲低Dvl-2表達(dá)、I...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要材料
    1.2．細(xì)胞培養(yǎng)
    1.3 Wnt3a影響細(xì)胞活性觀察
    1.4 Wnt3a影響細(xì)胞遷移能力觀察
    1.5 Wnt3a影響Dvl-2、PI3K-Akt-GSK3β通路活性觀察
    1.6 Dvl-2在Wnt3a影響細(xì)胞遷移能力中的作用觀察
    1.7 細(xì)胞中Wnt3a與Dvl-2、PI3K-Akt-GSK3β通路的調(diào)控關(guān)系分析
    1.8 PI3K-Akt-GSK3β通路在Wnt3a影響細(xì)胞遷移能力中的作用觀察
    1.9 Dvl-2調(diào)控PI3K-Akt-GSK3β通路在Wnt3a影響細(xì)胞遷移能力中的作用觀察
    1.1 0 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 Wnt3a對細(xì)胞遷移的影響
    2.2 Wnt3a對細(xì)胞中Dvl-2、PI3K-Akt-GSK3β通路活性影響
    2.3 Dvl-2在Wnt3a影響細(xì)胞遷移能力中的作用
    2.4 Wnt3a通過Dvl-2激活PI3K-Akt-GSK3β信號通路
    2.5 PI3K-Akt-GSK3β通路在Wnt3a影響細(xì)胞遷移能力中的作用
    2.6 Dvl-2調(diào)控PI3K-Akt-GSK3β通路在Wnt3a影響細(xì)胞遷移能力中的作用
3 討論



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