子癇前期(Preeclampsia,PE)是一種人類特有的、原因未知、特發(fā)于懷孕20周之后的妊娠期高血壓疾病。這種嚴(yán)重的妊娠期并發(fā)癥影響著全世界約3%-5%的孕婦。然而,其發(fā)病機(jī)制尚不明確。蛻膜化不足被認(rèn)為是子癇前期發(fā)病機(jī)制之一。DDIT4基因編碼一種蛋白,這種蛋白的主要功能是在壓力或應(yīng)激作用下抑制mTOR信號(hào)通路。有研究證明,DDIT4可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。我們之前的RNA-Seq結(jié)果表明DDIT4在子癇前期婦女蛻膜中的表達(dá)量明顯降低,因此,我們想要探究DDIT4在人類蛻膜化中的作用及其與子癇前期的關(guān)系。最終結(jié)果表明,與正常妊娠婦女相比,DDIT4在重度子癇前期蛻膜中表達(dá)量明顯下降,而在人工誘導(dǎo)蛻膜化模型中,無論是在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞系還是原代子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中,其表達(dá)量都明顯升高。在上述兩種細(xì)胞中使用小干擾RNA敲低DDIT4之后引起蛻膜化標(biāo)志分子如IGFBP1和PRL的表達(dá)量明顯下降,此外,敲低DDIT4之后會(huì)導(dǎo)致磷酸化mTOR和磷酸化p70s6k的上調(diào)及凋亡的減少。然而,雷帕霉素,一種mTOR抑制劑,可逆轉(zhuǎn)凋亡的變化。最后,我們發(fā)現(xiàn)重度子癇前期蛻膜中剪切型caspase 3的表達(dá)量...

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
緒論
1 前言
2 材料方法
    2.1 研究對(duì)象
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.3 常用溶劑的配置
    2.3 標(biāo)本采集
    2.4 Real-time PCR
        2.4.1 組織中RNA的提取
        2.4.2 細(xì)胞RNA提取
        2.4.3 RNA質(zhì)檢
        2.4.4 RNA濃度測(cè)定
        2.4.5 RNA逆轉(zhuǎn)錄
        2.4.6 Real-time PCR
    2.5 免疫組織化學(xué)
    2.6 免疫熒光
    2.7 蛋白免疫組織印記
        2.7.1 組織處理
        2.7.2 蛋白提取以及定量
        2.7.3 蛋白樣品定量測(cè)定
        2.7.4 Western Blot
        2.7.5 蛋白條帶結(jié)果分析
    2.8 細(xì)胞培養(yǎng)及蛻膜化
        2.8.1 復(fù)蘇細(xì)胞
        2.8.2 細(xì)胞換液
        2.8.3 細(xì)胞傳代
        2.8.4 細(xì)胞凍存
        2.8.5 體外誘導(dǎo)蛻膜化
    2.9 干擾
        2.9.1 干擾引物序列
        2.9.2 干擾操作步驟
    2.10 原代細(xì)胞提取
        2.10.1 原代子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的收取
        2.10.2 原代子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的分離提取
        2.10.3 原代子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的純度鑒定
    2.11 流式
        2.11.1 細(xì)胞處理
        2.11.2 流式細(xì)胞儀分析
        2.11.3 注意事項(xiàng)
    2.12 統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果
    3.1 研究對(duì)象的臨床特征
    3.2 DDIT4在SPE和 NP蛻膜組織中的表達(dá)及定位
        3.2.1 Real-time PCR結(jié)果
        3.2.2 Western Blot結(jié)果
        3.2.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果
    3.3 DDIT4 在蛻膜化hESCs和原代hESCs中的表達(dá)
        3.3.1 細(xì)胞在體外誘導(dǎo)蛻膜化的細(xì)胞形態(tài)
        3.3.2 DDIT4的mRNA及蛋白水平在誘導(dǎo)蛻膜化后的變化
    3.4 蛻膜化抑制mTOR信號(hào)通路,誘導(dǎo)凋亡
        3.4.1 蛻膜化對(duì)mTOR通路的影響
        3.4.2 蛻膜化對(duì)凋亡的影響
        3.4.3 蛻膜化對(duì)增殖的影響
    3.5 干擾DDIT4 影響蛻膜化和凋亡
        3.5.1 干擾DDIT4 后蛻膜細(xì)胞的形態(tài)變化及PRL、IGFBP1 的變化
        3.5.2 干擾DDIT4后mTOR信號(hào)通路上相關(guān)蛋白的變化
        3.5.3 干擾DDIT4 后蛻膜細(xì)胞凋亡的變化
        3.5.4 干擾DDIT4 后蛻膜細(xì)胞增殖的變化
    3.6 DDIT4 通過mTOR通路調(diào)控凋亡
        3.6.1 Western Blot結(jié)果
        3.6.2 流式細(xì)胞儀結(jié)果
    3.7 Cleaved-caspase3 在蛻膜組織中的表達(dá)
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：3748782