目的:在人類(lèi)細(xì)胞中,SFMBT1蛋白是一種多數(shù)蛋白,含有4個(gè)重復(fù)的MBT結(jié)構(gòu),對(duì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄沉默具有重要作用,可以與多種蛋白相互結(jié)合作用于DNA的轉(zhuǎn)錄抑制輔助因子。SFMBT1經(jīng)由其轉(zhuǎn)錄抑制作用,在保持細(xì)胞干性、加快細(xì)胞生長(zhǎng)、促進(jìn)癌癥細(xì)胞EMT及侵襲性方面有重要作用,可以促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)展和轉(zhuǎn)移,與腫瘤不良預(yù)后有關(guān)。本研究旨在探討SFMBT1表達(dá)對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖和遷移的影響,以及Notch信號(hào)通路關(guān)鍵因子和下游靶基因表達(dá)水平的變化,探討SFMBT1對(duì)HeLa細(xì)胞中Notch信號(hào)通路的作用。方法:構(gòu)建含有SFMBT1基因的重組真核表達(dá)載體prvkm-SFMBT1,通過(guò)雙酶切和基因測(cè)序鑒定;設(shè)計(jì)并合成SFMBT1的干擾RNA（siRNA）,同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組、prvkm-vector組及SFMBT1-siNC組。分別用prvkm-SFMBT1、prvkm-vector、siRNA-SFMBT1、SFMBT1-siNC轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞,48h后采用RT-qPCR和Western blot法檢測(cè)SFMBT1 mRNA和蛋白的相對(duì)表達(dá)水平;通過(guò)MTT法在轉(zhuǎn)染后0h、24h、48h、72h檢測(cè)細(xì)胞... 

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第1章 前言
    1.1 研究意義
    1.2 NOTCH信號(hào)通路的研究現(xiàn)狀
    1.3 SFMBT1蛋白研究現(xiàn)狀
    1.4 本課題立項(xiàng)依據(jù)與研究目標(biāo)
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 prvkm-SFMBT1、prvkm vector質(zhì)粒擴(kuò)增
        2.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染
        2.3.3 Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率
        2.3.4 RT-qPCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率
        2.3.5 MTT法檢測(cè)SFMBT1對(duì)HeLa細(xì)胞增殖的影響
        2.3.6 劃痕實(shí)驗(yàn)SFMBT1對(duì)HeLa細(xì)胞遷移的影響
        2.3.7 Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞后對(duì)Notch信號(hào)通路中相關(guān)靶基因蛋白的表達(dá)影響
        2.3.8 RT-qPCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞后對(duì)Notch信號(hào)通路中相關(guān)靶基因mRNA表達(dá)的影響
        2.3.9 ChIP實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SFMBT1與RBP-J相互作用
        2.3.10 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SFMBT1與RBP-J相互作用
第3章 結(jié)果與討論
    3.1 PRVKM-SFMBT1、PRVKM VECTOR質(zhì)粒擴(kuò)增
    3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率
    3.3 WESTERN BLOT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率
    3.4 RT-QPCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率結(jié)果
    3.5 MTT法檢測(cè)SFMBT1對(duì)HELA細(xì)胞增殖結(jié)果
    3.6 劃痕實(shí)驗(yàn)SFMBT1對(duì)HELA細(xì)胞遷移結(jié)果
    3.7 SFMBT1 過(guò)表達(dá)和抑制對(duì)NOTCH信號(hào)通路中相關(guān)靶基因MRNA與蛋白的表達(dá)影響
    3.8 CHIP實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SFMBT1與RBP-J相互作用
    3.9 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SFMBT1與RBP-J相互作用
第4章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄1 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
附錄2 攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項(xiàng)目


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miR-218靶向SFMBT1影響肺癌細(xì)胞凋亡的研究[J]. 馮永海,李宏云,余春華,吳擁軍,張國(guó)俊.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2018(15)
[2]miR-218負(fù)調(diào)控SFMBT1抑制肝癌細(xì)胞增殖[J]. 鄧榮華,黃進(jìn)團(tuán),谷欣.  臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2017(13)
[3]我國(guó)每死亡五人中就有一人死于癌癥[J]. 盧文潔.  共產(chǎn)黨員. 2011(23)

博士論文
[1]miR-218抑制宮頸癌細(xì)胞EMT、侵襲遷移及其機(jī)制研究[D]. 姜兆靜.南方醫(yī)科大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3697929