熱療是與先天免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)相關(guān)的醫(yī)學(xué)手段,可以刺激穩(wěn)態(tài)趨化因子、整聯(lián)蛋白、黏附因子以及細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2等的表達(dá)。在對(duì)宮頸癌的治療中增加熱療也會(huì)刺激細(xì)胞因子的分泌,誘導(dǎo)強(qiáng)烈的全身性抗HPV免疫反應(yīng),但人們目前對(duì)熱療促進(jìn)細(xì)胞因子表達(dá)的機(jī)制的了解還有不足。cGAS是近年來發(fā)現(xiàn)的一種胞質(zhì)DNA識(shí)別分子,感受到胞質(zhì)中的異常DNA后會(huì)激活細(xì)胞的cGAS-STING通路,產(chǎn)生I型IFN反應(yīng),是細(xì)胞先天免疫的重要組成部分。HPV作為雙鏈DNA病毒,感染細(xì)胞后會(huì)被細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞間的多種免疫機(jī)制清除。相應(yīng)地,HPV也進(jìn)化出多重機(jī)制逃避宿主的免疫反應(yīng),完成持續(xù)感染的病毒便是在一定程度上逃避了先天免疫反應(yīng)和適應(yīng)性免疫反應(yīng)的作用。為探究熱療對(duì)cGAS表達(dá)的影響,本研究選取HPV18陽性宮頸癌細(xì)胞He La和HPV16陽性宮頸癌細(xì)胞Si Ha為研究對(duì)象,建立了加熱處理細(xì)胞的模型,用以研究宮頸癌細(xì)胞對(duì)熱療的短期應(yīng)答和循環(huán)熱處理后的細(xì)胞反應(yīng)。通過q RT-PCR檢測(cè)42℃加熱培養(yǎng)后宮頸癌細(xì)胞內(nèi)cGAS的轉(zhuǎn)錄水平,同時(shí)檢測(cè)另一核酸識(shí)別分子RIG-1的表達(dá)。結(jié)果顯示42℃培養(yǎng)60 min后cGAS的m... 

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 課題背景及研究的目的意義
    1.2 HPV的致癌機(jī)制
        1.2.1 癌蛋白E6和E7的關(guān)鍵作用
        1.2.2 免疫逃逸
        1.2.3 HPV對(duì)細(xì)胞表觀遺傳的影響
    1.3 熱療
        1.3.1 熱療的簡(jiǎn)介
        1.3.2 熱療在腫瘤治療中的應(yīng)用
        1.3.3 熱療的作用機(jī)制
        1.3.4 熱療對(duì)宮頸癌治療的作用
    1.4 主要研究?jī)?nèi)容
    1.5 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞系、菌株及質(zhì)粒
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)所用引物
    2.2 實(shí)驗(yàn)主試劑與儀器
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)所需試劑及耗材
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑配方
        2.2.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器及生物學(xué)分析軟件
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.2 RNA水平的檢測(cè)
        2.3.3 蛋白表達(dá)及純化
第3章 熱處理對(duì)cGAS表達(dá)的影響
    3.1 引言
    3.2 宮頸癌細(xì)胞熱處理模型的確立
    3.3 42℃培養(yǎng)對(duì)宮頸癌細(xì)胞cGAS和 RIG-1 轉(zhuǎn)錄水平的影響
        3.3.1 42℃培養(yǎng)對(duì)宮頸癌細(xì)胞cGAS轉(zhuǎn)錄水平的影響
        3.3.2 42℃培養(yǎng)對(duì)宮頸癌細(xì)胞RIG-1轉(zhuǎn)錄水平的影響
    3.4 42℃培養(yǎng)對(duì)C關(guān)鍵癌蛋白E6和E7 轉(zhuǎn)錄水平的影響
        3.4.1 42℃培養(yǎng)對(duì)hrHPV癌基因E6 轉(zhuǎn)錄水平的影響
        3.4.2 42℃培養(yǎng)對(duì)hrHPV癌基因E7 轉(zhuǎn)錄水平的影響
    3.5 IPTG誘導(dǎo)重組蛋白在E.coli BL21(DE3)中表達(dá)
    3.6 討論
    3.7 本章小結(jié)
第4章 熱處理對(duì)表觀遺傳修飾的調(diào)節(jié)
    4.1 引言
    4.2 42℃培養(yǎng)對(duì)宮頸癌細(xì)胞EP300轉(zhuǎn)錄水平的影響
    4.3 42℃培養(yǎng)對(duì)宮頸癌細(xì)胞GCN5轉(zhuǎn)錄水平的影響
    4.4 cGAS甲基化分析
    4.5 討論
    4.6 本章小結(jié)
結(jié)論
展望
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]中國(guó)宮頸癌防治任重而道遠(yuǎn)[J]. 喬友林.  中華腫瘤雜志. 2018 (10)



本文編號(hào)：3676167