目的:假性軟骨發(fā)育不全（PSACH）是一種罕見的常染色體顯性遺傳病,患病率約為1/30000,與軟骨寡聚基質(zhì)蛋白（COMP）基因突變相關(guān),其特征是短肢型侏儒、鴨步態(tài)和早發(fā)性骨關(guān)節(jié)炎等。患者通常在出生時(shí)身高和體重?zé)o異常,在18-24個(gè)月左右出現(xiàn)生長遲緩,成年個(gè)體身高通常在82-130厘米之間。臨床中,針對(duì)PSACH尚無有效的干預(yù)手段。COMP基因位于19號(hào)染色體,編碼COMP蛋白。COMP蛋白是一種細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白,是血小板反應(yīng)蛋白家族成員之一。COMP蛋白,由5個(gè)亞單位組成,每個(gè)亞單位有一個(gè)N端結(jié)構(gòu)域、四個(gè)表皮生長因子區(qū)、七個(gè)T3重復(fù)區(qū)和一個(gè)羥基末端球狀區(qū)（CTD）。T3重復(fù)區(qū)和CTD區(qū)富含鈣離子結(jié)合位點(diǎn),在蛋白質(zhì)折疊中起主導(dǎo)作用。在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的200多個(gè)導(dǎo)致PSACH的突變中,85%位于T3重復(fù)區(qū),15%位于CTD區(qū)。電鏡研究發(fā)現(xiàn),T3區(qū)域突變引起的PSACH患者軟骨細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）中積聚了大量突變的COMP蛋白和其他細(xì)胞外基質(zhì)蛋白,進(jìn)而引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,導(dǎo)致軟骨細(xì)胞過早凋亡,引發(fā)軟骨內(nèi)骨形成受損。目前,CTD區(qū)域突變引起的PSACH的發(fā)病機(jī)制尚無明確定論,有待進(jìn)一步探索。本研究擬... 

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :假性軟骨發(fā)育不全疾病的胚胎植入前遺傳學(xué)檢測
    1前言
    2 材料和方法
        2.0 研究對(duì)象
        2.1 主要試劑及耗材
        2.2 主要儀器
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 基因組DNA提取與Sanger測序
            2.3.2 變異位點(diǎn)致病性評(píng)價(jià)
            2.3.3 卵胞漿內(nèi)單精子注射
            2.3.4 囊胚活檢
            2.3.5 單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增
            2.3.6 多重PCR擴(kuò)增目標(biāo)區(qū)域
            2.3.7 高通量測序
    3 結(jié)果
        3.1 患者家系基因分析
        3.2 文獻(xiàn)與數(shù)據(jù)庫檢索分析
        3.3 生物信息學(xué)預(yù)測分析
        3.4 變異位點(diǎn)致病性分類
        3.5 胚胎植入前遺傳學(xué)檢測結(jié)果分析
        3.6 胚胎移植與妊娠結(jié)局
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :假性軟骨發(fā)育不全疾病特異性干細(xì)胞系的建立
    1前言
    2 材料和方法
        2.1 研究對(duì)象
        2.2 主要試劑及耗材
        2.3 主要儀器
        2.4 實(shí)驗(yàn)方法
            2.4.1 Men SCs的分離及培養(yǎng)
            2.4.2 Men SCs的鑒定
            2.4.3 Men SCs體外誘導(dǎo)重編程
            2.4.4 iPS細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.4.5 iPS細(xì)胞鑒定
            2.4.6 基因組DNA提取與Sanger測序
    3 結(jié)果
        3.1 PSACH源 Men SCs細(xì)胞系的建立與鑒定
        3.2 PSACH源 i PS細(xì)胞株的建立
        3.3 PSACH源 i PS細(xì)胞株的鑒定
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 :假性軟骨發(fā)育不全疾病相關(guān)致病分子機(jī)制研究
    1前言
    2 材料與方法
        2.0 研究對(duì)象
        2.1 主要試劑及耗材
        2.2 主要儀器
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 細(xì)胞增殖和凋亡檢測
            2.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            2.3.3 甲苯胺藍(lán)染色陽性率計(jì)算
            2.3.4 TUNEL凋亡檢測
            2.3.5 電鏡
            2.3.6 分子動(dòng)力學(xué)模擬與分析
            2.3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 結(jié)果
        3.1 PSACH與 WT源 Men SCs的特點(diǎn)
        3.2 PSACH與 WT源 Men SCs成軟骨分化情況比較
        3.3 PSACH與 WT源 Men SCs成軟骨分化內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平比較
        3.4 分子動(dòng)力學(xué)模擬結(jié)果分析
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究的創(chuàng)新性自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]罕見假性軟骨發(fā)育不全軟骨寡聚基質(zhì)蛋白基因突變一例[J]. 羅國晶,唐學(xué)陽,田麗,陳香,萬珊,余希杰.  中國修復(fù)重建外科雜志. 2017(12)



本文編號(hào)：3649441