本文關(guān)鍵詞：卵巢癌外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測及分子表型分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分卵巢癌免疫磁珠的合成及表征目的制備靶向卵巢癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞的免疫磁珠并對免疫磁珠的活性進行表征。方法：采用EDC/NHS活化羧基磁珠,活化的羧基末端通過EDC與抗體分子上的氨基相交聯(lián),NHS穩(wěn)定合成的免疫磁珠。EPCAM為上皮細(xì)胞胞膜表面特異分子,為共有細(xì)胞表面標(biāo)志物。MUC16為卵巢癌細(xì)胞膜表面特異分子,是卵巢癌組織特異細(xì)胞表面標(biāo)志物。羧基磁珠活化后將EPCAM/MUC16抗體偶聯(lián)在磁珠表面制備卵巢癌特異的免疫磁珠。通過IF及FCM方法對合成的免疫磁珠分散性及免疫活性進行鑒定。結(jié)果：通過用抗單克隆抗體Fc段的熒光二抗對免疫磁珠進行流式分析,顯示EPCAM、MUC 16兩種抗體與磁珠結(jié)合后表達率分別為：94.17±1.05%、97.80±0.60%,免疫熒光分析示磁珠與抗體結(jié)合后分散性良好。結(jié)論：實驗成功制備出卵巢癌特異性EPCAM/MUC16免疫磁珠,免疫磁珠分散均勻,抗體活性高,提示免疫磁珠具有較高活性結(jié)合目的細(xì)胞。第二部分卵巢癌CTCs模型建立與免疫磁珠檢測目的探討EPCAM/MUC16免疫磁珠富集卵巢癌外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的靈敏度與特異性。方法培養(yǎng)卵巢癌SKOV3細(xì)胞,流式分析SKOV3細(xì)胞表面EPCAM/MUC16表達率。將20/50/100個SKOV3細(xì)胞加入4m1健康志愿者外周血中制備循環(huán)腫瘤細(xì)胞模型,分別用EPCAM免疫磁珠,MUC16免疫磁珠,EPCAM/MUC16免疫磁珠對循環(huán)腫瘤細(xì)胞模型進行富集與鑒定。結(jié)果EPCAM/MUC16在SKOV3細(xì)胞株中的表達率分別為99.41%,99.99%。EPCAM、MUC16單獨與共同的檢測限值均為每4ml血液中有50個SKOV3細(xì)胞,但能穩(wěn)定檢出細(xì)胞的界限值為每4ml血液中有100個SKOV3細(xì)胞,三組結(jié)果統(tǒng)計無差異(P0.05)。免疫磁珠不與外周血白細(xì)胞相結(jié)合,僅與部分細(xì)胞膜碎片相結(jié)合。結(jié)論EPCAM/MUC16免疫磁珠對卵巢癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞具有較高的靈敏度與特異性。第三部分卵巢癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞分子表型分析目的探討卵巢癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞中EPCAM,MUC16分子的表達情況方法將采集的30例Ⅲ期上皮性卵巢癌12ml外周血樣本,每例均分為4m1樣本,同時使用EPCAM免疫磁珠、MUC16免疫磁珠、混合磁珠(兩種磁珠1：1混合)進行檢測,三種檢測方法所使用磁珠總量相同。免疫磁珠富集的細(xì)胞HE染色后鑒定檢測值。結(jié)果EPCAM、MUC16單獨檢測CTCs與共同檢測CTCs的檢測值分別為22±11、14±6、28±12(P0.05)。通過對免疫磁珠富集出的CTCs進行HE染色顯示免疫磁珠圍繞吸附CTCs。結(jié)論通過EPCAM、MUC16免疫磁珠單獨與共同應(yīng)用檢測CTCs模型與病人血樣本,結(jié)果顯示在敏感性檢測中,其無統(tǒng)計學(xué)差異,但在患者外周血中有統(tǒng)計學(xué)差異,推測外周血中EPCAM、MUC16表達比率較培養(yǎng)的SKOV3穩(wěn)定細(xì)胞株發(fā)生變化。EPCAM免疫磁珠在患者外周血中瘤細(xì)胞檢出率大于MUC16免疫磁珠檢測值,說明在外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞中EPCAM表達率高于MUC 16,而兩者混合免疫磁珠檢測值高于單獨使用EPCAM作為免疫磁珠檢測,推測外周血中部分不表達EPCAM的CTCs表達MUC16,MUC16與EPCAM獨立表達。
【關(guān)鍵詞】：免疫磁珠 SKOV3細(xì)胞 循環(huán)腫瘤細(xì)胞 EPCAM MUC16 免疫磁珠 EPCAM MUC16 免疫磁珠 卵巢癌 循環(huán)腫瘤細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-15
• 第一部分 卵巢癌免疫磁珠的合成及表征15-18
• 1 材料與方法15-16
• 2 結(jié)果16-17
• 3 討論17-18
• 第二部分 卵巢癌CTCs模型建立與免疫磁珠檢測18-23
• 1 材料與方法18-20
• 2 結(jié)果20-21
• 3 討論21-23
• 第三部分 卵巢癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞分子表型分析23-26
• 1 材料與方法23
• 2 結(jié)果23-24
• 3 討論24-26
• 全文總結(jié)26-28
• 參考文獻28-31
• 附圖31-35
• 文獻綜述35-42
• 參考文獻38-42
• 致謝42-43
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文43

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  本文關(guān)鍵詞：卵巢癌外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測及分子表型分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：363741