第一部分線粒體融合蛋白2（Mfn2）體外誘導(dǎo)人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡作用及機(jī)制目的研究Mfn2在體外實(shí)驗(yàn)中對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞的作用及影響,并探討其相關(guān)的分子機(jī)制。方法設(shè)置不同濃度的Adv-Mfn2組,設(shè)Adv-control為對(duì)照組。采用CCK-8法檢測(cè)Adv-Mfn2對(duì)HeLa細(xì)胞增殖的影響;應(yīng)用流式細(xì)胞儀采用Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)Adv-Mfn2對(duì)HeLa細(xì)胞凋亡的影響,同時(shí)應(yīng)用JC-1法檢測(cè)Adv-Mfn2對(duì)HeLa細(xì)胞線粒體膜電位變化的影響。應(yīng)用western blot方法分別檢測(cè)Adv-Mfn2對(duì)HeLa細(xì)胞caspase-3和caspase-9活性的影響;檢測(cè)對(duì)Bcl-2家族蛋白中Bax以及Bcl-2的蛋白表達(dá)水平的影響;檢測(cè)p53蛋白表達(dá)水平的變化。結(jié)果Western blot方法結(jié)果顯示應(yīng)用Adv-Mfn2干預(yù)HeLa細(xì)胞。與空白對(duì)照組以及Adv-control相比,Mfn2蛋白表達(dá)水平增高。應(yīng)用CCK-8檢測(cè)結(jié)果提示Adv-Mfn2對(duì)HeLa細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用,且呈劑量依賴與時(shí)間依賴的關(guān)系。Annexin V-FITC/PI雙染細(xì)胞凋... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

Mfn2對(duì)HeLa細(xì)胞增殖增影響

圖 1Mfn2 對(duì) HeLa 細(xì)胞增殖增影響Mfn2 對(duì) HeLa 細(xì)胞作用 8 小時(shí)以及增殖有明顯的抑制作用，而這種抑制＜0.01） Adv-Mfn2 干預(yù) HeLa 細(xì)胞，應(yīng)用 Western blot 法檢測(cè) Mfn2 表達(dá)情況

華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文如圖 2 所示，應(yīng)用 Adv-Mfn2 干預(yù)的 HeLa 細(xì)胞內(nèi) Mfn2 表達(dá)水平增高，分別與空白對(duì)照組以及 Adv-control 組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（**P ＜0.01 與空白對(duì)照組相比，##P ＜0.01 與 Adv-control 組相比）。結(jié)合 CCK-8 的結(jié)果提示過表達(dá) Mfn2 可以抑制HeLa 細(xì)胞增殖，且呈劑量與時(shí)間依賴性的特點(diǎn)。2. 過表達(dá) Mfn2 誘導(dǎo) HeLa 細(xì)胞凋亡Annexin V 是一種磷脂結(jié)合蛋白質(zhì)，由于其對(duì)磷脂酰絲氨酸有較高的親和力，故可以使用 Annexin V 對(duì)細(xì)胞表面的磷脂酰絲氨酸進(jìn)行檢測(cè)。HeLa 細(xì)胞種入六孔板內(nèi)同步化后分別加入 Adv-control 或 Adv-mfn2，應(yīng)用濃度分別為 90 或 120pfu/ml 的Adv-Mfn2 孵育 48 小時(shí)以及 60 小時(shí)后將細(xì)胞收集應(yīng)用流式細(xì)胞儀采用 AnnexinV-FITC/PI 法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3623438