目的研究微小RNA-34a-5p （miR-34a-5p）靶向AKT1基因?qū)ψ訉m內(nèi)膜異位癥（EM）子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞（ESCs）侵襲及自噬的調(diào)控作用。方法原代分離、培養(yǎng)EM患者ESCs,構(gòu)建negative control RNA （NC）及mimic細(xì)胞模型,采用雙熒光腎素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證miR-34a-5p與AKT1基因存在結(jié)合位點(diǎn),RT-PCR及Western blotting檢測(cè)并驗(yàn)證2組細(xì)胞miR-34a-5p和AKT1基因的表達(dá)及調(diào)控關(guān)系;檢測(cè)miR-34a-5p對(duì)ESCs的增殖、遷移、侵襲、凋亡的影響。結(jié)果 EM患者ESCs中miR-34a-5p較非EM患者明顯降低,而AKT1基因的表達(dá)明顯升高,且兩者變化呈負(fù)相關(guān);miR-34a-5p通過特異性結(jié)合AKT1基因的3’UTR區(qū)對(duì)AKT1基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控;轉(zhuǎn)染miR-34a-5p mimic可使ESCs中miR-34a-5p表達(dá)升高,AKT1基因表達(dá)降低,同時(shí)使ESCs的增殖、遷移及侵襲能力增強(qiáng),而凋亡及自噬能力下降。結(jié)論 miR-34a-5p靶向AKT1基因促進(jìn)ESCs的增殖、遷移及侵襲能力,降低其凋亡及自噬能力,可能在EM... 

【文章來源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,49(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

ESCs和EECs免疫熒光雙染色×200

將野生型及突變型AKT1基因3’UTR熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒與NC及miR-34a-5p mimic分別共轉(zhuǎn)染ESCs，統(tǒng)計(jì)4組相對(duì)熒光素酶活性的差異。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染野生型AKT1基因3’UTR熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒的ESCs中，轉(zhuǎn)染miR-34a-5p mimic組較NC組相對(duì)熒光素酶活性顯著降低（P<0.01），而轉(zhuǎn)染突變型AKT1基因3’UTR熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒ESCs中，NC組及miR-34a-5p mimic組相對(duì)熒光素酶活性無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。說明ESCs中miR-34a-5p與AKT1基因存在一定的結(jié)合區(qū)域，miR-34a-5p對(duì)AKT1基因的表達(dá)具有調(diào)控作用。見圖2。2.5 miR-34a-5p過表達(dá)抑制ESCs增殖

流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，NC組ESCs凋亡率（8.82%±3.5%）較mi R-34a-5p mimic組（17.42%±2.8%）顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。qRT-PCR結(jié)果顯示，NC組LC3基因表達(dá)水平明顯低于mi R-34a-5p mimic組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見圖5。圖3 miR-34a-5p過表達(dá)抑制ESCs遷移能力×200


本文編號(hào)：3593650