探討miR-206/CDK4信號(hào)在卵巢癌生長(zhǎng)和化療增敏中的作用。方法分別提取卵巢癌和癌旁組織總RNA并將它們逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)miR-206在卵巢癌和癌旁組織中差異表達(dá)。在將miR-206 mimic和其特異抑制劑以及它們各自對(duì)照分別轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞后,MTT和流式細(xì)胞儀用于檢測(cè)細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的改變。Western blot和熒光素酶報(bào)告基因活性分析鑒定miR-206的靶基因和其調(diào)控信號(hào)通路。miR-206誘導(dǎo)5-Fu對(duì)卵巢癌細(xì)胞化療增敏作用被鑒定。結(jié)果熒光定量PCR分析顯示,miR-206在卵巢癌組織中表達(dá)明顯下調(diào)。在轉(zhuǎn)染miR-206 mimics后,細(xì)胞的增殖明顯抑制,細(xì)胞周期也出現(xiàn)G/S轉(zhuǎn)化障礙。機(jī)制分析顯示,miR-206 mimic能明顯抑制CDK4,c-Myc和CCND1表達(dá)。與之相反,在使用miR-206特異抑制劑后,細(xì)胞的增殖能力明顯恢復(fù),而CDK4表達(dá)能明顯增高。熒光素酶報(bào)告基因活性分析顯示,miR-206能直接結(jié)合CDK43’UTR。藥敏分析顯示,miR-206能明顯降低IC50值（P<0.001）,從而增加5-Fu對(duì)卵巢癌細(xì)胞的敏感... 

【文章來(lái)源】：南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2017,37(03)北大核心CSCD

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miR-206在卵巢癌組織中表達(dá)下調(diào)Fig.1Down-regulatedexpressionofmiR-206in0TumorNormal

測(cè)為miR-206直接靶基因（圖5A）。進(jìn)一步熒光素酶活性分析顯示，miR-206能明顯抑制CDK43’UTR的熒光素酶活性；與之相反，miR-206in-hibitor后能明顯增加CDK43’UTR的熒光素酶活性；在CDK43’UTRmiR-206結(jié)合位點(diǎn)突變后，熒光素酶活性不再受miR-206的影響（圖5B）。2.6化療增敏分析為了明確miR-206對(duì)5-Fu化療增敏作用，我們分析了miR-206對(duì)于卵巢癌細(xì)胞5-FuIC50值的改變。結(jié)圖1miR-206在卵巢癌組織中表達(dá)下調(diào)Fig.1Down-regulatedexpressionofmiR-206inovariancancertissues.43210TumorNormaloldsF圖2miR-206抑制卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)Fig.2miR-206suppressescellgrowthofovariancancercellsinvitro.A:GrowthcurveofcellstreatedwithmiR-206mimics;B:GrowthcurveofcellstreatedwiththemiR-206inhibitor.123DaysDOaluev1.51.00.50CtrmiR-206inhibitorCtrmiR-206mimicsDOaluev1.51.00.50123DaysAB果顯示，與對(duì)照細(xì)胞相比，miR-206mimics能明顯降低卵巢癌細(xì)胞的IC50值（40.32μmol/Lvs17.13μmol/L，P<0.001，圖6）。3討論卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)腫瘤之一，預(yù)后較差，這與其復(fù)雜的發(fā)病機(jī)理有關(guān)。miR-206作為肌肉性miR-1家族成員，是一個(gè)骨骼肌特異表達(dá)的miRNA，參與了肌肉發(fā)育過(guò)程。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)，miR-206參與了腫瘤發(fā)病過(guò)程。在大腸癌中，miR-206被報(bào)導(dǎo)直接靶擊FMNL2［8］和NOTCH3［9］基因，從而抑制大腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、游走和侵襲。在非小細(xì)胞肺癌中，Sun等發(fā)現(xiàn)，miR-206直接抑制c-Met，BCL-2和SOX9誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖、游走和侵襲［10-11］。在乳腺癌中，miR-206能直接靶擊Cx43，PKFFB3，Actin-bind-ingproteincoronin1C和cyclinD2蛋?

復(fù)雜的發(fā)病機(jī)理有關(guān)。miR-206作為肌肉性miR-1家族成員，是一個(gè)骨骼肌特異表達(dá)的miRNA，參與了肌肉發(fā)育過(guò)程。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)，miR-206參與了腫瘤發(fā)病過(guò)程。在大腸癌中，miR-206被報(bào)導(dǎo)直接靶擊FMNL2［8］和NOTCH3［9］基因，從而抑制大腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、游走和侵襲。在非小細(xì)胞肺癌中，Sun等發(fā)現(xiàn)，miR-206直接抑制c-Met，BCL-2和SOX9誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖、游走和侵襲［10-11］。在乳腺癌中，miR-206能直接靶擊Cx43，PKFFB3，Actin-bind-ingproteincoronin1C和cyclinD2蛋白，從而降低了細(xì)圖3miR-206抑制卵巢癌細(xì)胞細(xì)胞周期G1/S轉(zhuǎn)化Fig.3miR-206inhibitscellcycletransitionfromG1toSphase.G1:55.25S:25.09G2:19.36CtrMimicselCumbernelCumbern8006004002000G1:59.38S:20.01G2:20.6160050040030020010000204060801000306090http://www.j-smu.comJSouthMedUniv,2017,37(3):393-397·395·

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miR-181b通過(guò)靶向調(diào)控N-myc下游調(diào)節(jié)基因2影響骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲[J]. 邵建立,李志忠,王亮,焦根龍,周志剛,孫國(guó)棟.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(03)
[2]微小RNA-34a通過(guò)靶向CD44調(diào)節(jié)膀胱癌細(xì)胞J82周期[J]. 余淦,許凱,許世安,張曉嵐,黃倩華,郎斌.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(07)



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