發(fā)布時間：2021-12-09 03:38

　　背景與目的:Rab11基因在宮頸癌細胞中高表達,可能與細胞惡性轉(zhuǎn)化相關(guān)。本研究采用RNA干擾技術(shù)下調(diào)Rab11基因表達,并探討其對宮頸癌HeLa/SiHa細胞侵襲遷移的影響及可能的相關(guān)機制。方法:將HeLa/SiHa細胞分為2組:陰性對照組（轉(zhuǎn)染陰性對照的小干擾RNA）和Rab11 siRNA干擾組（轉(zhuǎn)染小干擾Rab11siRNA）。蛋白[質(zhì)]印跡法（Western blot）檢測Rab11干擾效果,檢測轉(zhuǎn)染Rab11 si RNA后,侵襲相關(guān)蛋白Rac1、基質(zhì)金屬蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）和MMP9表達的變化;細胞劃痕損傷實驗檢測細胞遷移;Transwell實驗檢測細胞侵襲;細胞免疫熒光實驗從形態(tài)學角度探索在小干擾Rab11后Rac1蛋白在細胞膜上聚集位置的變化。結(jié)果:轉(zhuǎn)染小干擾Rab11siRNA到He La/SiHa細胞后,Rab11蛋白表達受到高效抑制（P<0.01）;細胞遷移、侵襲能力受到抑制（P<0.05）,Rac1蛋白表達明顯下調(diào)（P<0.01）,MMP2、MMP9蛋白表達下調(diào)（P<0.05）,Rab... 

【文章來源】：中國癌癥雜志. 2016,26(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

Rab11siRNA對于Rab11蛋白表達的影響

24012、24和36h時在倒置顯微鏡下(10×10)測量劃痕的寬度。細胞遷移率=(1-測量時劃痕寬度/初始劃痕寬度)×100%。1.2.5細胞免疫熒光實驗檢測Rac1的定位改變將兩組轉(zhuǎn)染后的細胞培養(yǎng)48h的6孔板(鋪有蓋玻片)從培養(yǎng)箱中取出，PBS洗后，4%多聚甲醛固定20min，0.5%TritonX-100處理細胞10min，2%BSA封閉lh，每個蓋玻片上滴加50μL稀釋好的一抗，置于4℃過夜，每個蓋玻片上加入50μL左右稀釋好的熒光二抗，室溫溫育1h，每孔加入染核試劑DAPI少許，室溫下放置5min，加入封片劑封片，熒光顯微鏡下觀察拍照。1.3統(tǒng)計學處理所有研究均設3份平行實驗，采用SPSS16.0軟件對上述結(jié)果進行分析，計量資料采用x±s表示，組間兩兩比較采用t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2結(jié)果2.1Rab11siRNA干擾后Rab11蛋白的抑制情況Westernblot檢測結(jié)果顯示，在25×103處有灰色條帶顯示，Rab11蛋白在Rab11siRNA組的表達量明顯低于si-negativecontrol組(HeLa組t=5.120，P＜0.01，SiHa組t=4.956，P＜0.01，圖1)。2.2Rab11siRNA轉(zhuǎn)染后細胞侵襲能力的檢測Transwell小室實驗結(jié)果顯示，與si-negativecontrol組相比，轉(zhuǎn)染Rab11siRNA組HeLa/SiHa細胞的侵襲能力明顯下降，差異均有統(tǒng)計學意義(HeLa組t=16.841，P＜0.01；SiHa組t=18.244，P＜0.01，圖2)。圖1Rab11siRNA對于Rab11蛋白表達的影響Fig.1EffectofRab11siRNAonRab11expression圖2Rab11siRNA對宮頸癌HeLa/SiHa細胞侵襲能力的影響Fig.2EffectofRab11siRNAoncervicalcancerHeLa/SiHacellinvasioncapacity闞巖巖，等.下調(diào)Rab11基因?qū)m頸癌HeLa/SiHa細胞侵襲遷移的影響及機制探討

《中國癌癥雜志》2016年第26卷第3期2412.3Rab11siRNA轉(zhuǎn)染后細胞遷移能力的檢測細胞劃痕損傷實驗結(jié)果顯示，Rab11siRNA組與si-negativecontrol組相比，HeLa/SiHa細胞的遷移能力明顯降低(HeLa組24ht=3.909，P＜0.01，36ht=2.997，P＜0.05，SiHa組24ht=4.007，P＜0.01，36ht=2.838，P＜0.05，圖3)。2.4Rab11siRNA干擾后Rac1、MMP2和MMP9蛋白的表達情況Westernblot檢測結(jié)果顯示，在21×103、72×103和92×103處有灰色條帶顯示，Rac1、MMP2和MMP9蛋白在Rab11siRNA組的表達量明顯低于si-negativecontrol組(Rac1蛋白HeLa組t=8.794，P<0.01，SiHa組t=15.650，P<0.01；MMP2蛋白HeLa組t=5.634，P<0.01，SiHa組t=4.391，P<0.05；MMP9蛋白HeLa組t=3.430，P<0.05，SiHa組t=4.082，P<0.05，圖4)。2.5轉(zhuǎn)染Rab11siRNA對宮頸癌細胞骨架蛋白Rac1定位的影響Rab11siRNA組與si-negativecontrol組相比，分布在細胞周圍的紅色熒光強度降低，集中在細胞膜前端上的紅色熒光明顯減少(紅色熒光為分布在細胞膜上的Rac1蛋白，藍色熒光為細胞核DAPI染色，圖5)。圖3Rab11siRNA對宮頸癌HeLa/SiHa細胞遷移能力的影響Fig.3EffectofRab11siRNAoncervicalcancerHeLa/SiHacellmigrationcapacity圖4Rab11siRNA對宮頸癌HeLa/SiHa細胞中Rac1、MMP2和MMP9蛋白表達的影響Fig.4EffectofRab11siRNAonRac1,MMP2andMMP9expressioninhumancervicalcancerHeLa/SiHacell

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Ⅰb2期巨塊型宮頸癌術(shù)前不同治療方法的療效觀察[J]. 韓娜娜,邵文裕,劉開江,馬焱.  中國癌癥雜志. 2015(01)



本文編號：3529841