背景與目的:Rab11基因在宮頸癌細(xì)胞中高表達(dá),可能與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化相關(guān)。本研究采用RNA干擾技術(shù)下調(diào)Rab11基因表達(dá),并探討其對(duì)宮頸癌HeLa/SiHa細(xì)胞侵襲遷移的影響及可能的相關(guān)機(jī)制。方法:將HeLa/SiHa細(xì)胞分為2組:陰性對(duì)照組（轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照的小干擾RNA）和Rab11 siRNA干擾組（轉(zhuǎn)染小干擾Rab11siRNA）。蛋白[質(zhì)]印跡法（Western blot）檢測(cè)Rab11干擾效果,檢測(cè)轉(zhuǎn)染Rab11 si RNA后,侵襲相關(guān)蛋白R(shí)ac1、基質(zhì)金屬蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）和MMP9表達(dá)的變化;細(xì)胞劃痕損傷實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移;Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲;細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)從形態(tài)學(xué)角度探索在小干擾Rab11后Rac1蛋白在細(xì)胞膜上聚集位置的變化。結(jié)果:轉(zhuǎn)染小干擾Rab11siRNA到He La/SiHa細(xì)胞后,Rab11蛋白表達(dá)受到高效抑制（P<0.01）;細(xì)胞遷移、侵襲能力受到抑制（P<0.05）,Rac1蛋白表達(dá)明顯下調(diào)（P<0.01）,MMP2、MMP9蛋白表達(dá)下調(diào)（P<0.05）,Rab... 

【文章來源】：中國(guó)癌癥雜志. 2016,26(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

Rab11siRNA對(duì)于Rab11蛋白表達(dá)的影響

24012、24和36h時(shí)在倒置顯微鏡下(10×10)測(cè)量劃痕的寬度。細(xì)胞遷移率=(1-測(cè)量時(shí)劃痕寬度/初始劃痕寬度)×100%。1.2.5細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Rac1的定位改變將兩組轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞培養(yǎng)48h的6孔板(鋪有蓋玻片)從培養(yǎng)箱中取出，PBS洗后，4%多聚甲醛固定20min，0.5%TritonX-100處理細(xì)胞10min，2%BSA封閉lh，每個(gè)蓋玻片上滴加50μL稀釋好的一抗，置于4℃過夜，每個(gè)蓋玻片上加入50μL左右稀釋好的熒光二抗，室溫溫育1h，每孔加入染核試劑DAPI少許，室溫下放置5min，加入封片劑封片，熒光顯微鏡下觀察拍照。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有研究均設(shè)3份平行實(shí)驗(yàn)，采用SPSS16.0軟件對(duì)上述結(jié)果進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用x±s表示，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1Rab11siRNA干擾后Rab11蛋白的抑制情況Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，在25×103處有灰色條帶顯示，Rab11蛋白在Rab11siRNA組的表達(dá)量明顯低于si-negativecontrol組(HeLa組t=5.120，P＜0.01，SiHa組t=4.956，P＜0.01，圖1)。2.2Rab11siRNA轉(zhuǎn)染后細(xì)胞侵襲能力的檢測(cè)Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與si-negativecontrol組相比，轉(zhuǎn)染Rab11siRNA組HeLa/SiHa細(xì)胞的侵襲能力明顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(HeLa組t=16.841，P＜0.01；SiHa組t=18.244，P＜0.01，圖2)。圖1Rab11siRNA對(duì)于Rab11蛋白表達(dá)的影響Fig.1EffectofRab11siRNAonRab11expression圖2Rab11siRNA對(duì)宮頸癌HeLa/SiHa細(xì)胞侵襲能力的影響Fig.2EffectofRab11siRNAoncervicalcancerHeLa/SiHacellinvasioncapacity闞巖巖，等.下調(diào)Rab11基因?qū)m頸癌HeLa/SiHa細(xì)胞侵襲遷移的影響及機(jī)制探討

《中國(guó)癌癥雜志》2016年第26卷第3期2412.3Rab11siRNA轉(zhuǎn)染后細(xì)胞遷移能力的檢測(cè)細(xì)胞劃痕損傷實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Rab11siRNA組與si-negativecontrol組相比，HeLa/SiHa細(xì)胞的遷移能力明顯降低(HeLa組24ht=3.909，P＜0.01，36ht=2.997，P＜0.05，SiHa組24ht=4.007，P＜0.01，36ht=2.838，P＜0.05，圖3)。2.4Rab11siRNA干擾后Rac1、MMP2和MMP9蛋白的表達(dá)情況Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，在21×103、72×103和92×103處有灰色條帶顯示，Rac1、MMP2和MMP9蛋白在Rab11siRNA組的表達(dá)量明顯低于si-negativecontrol組(Rac1蛋白HeLa組t=8.794，P<0.01，SiHa組t=15.650，P<0.01；MMP2蛋白HeLa組t=5.634，P<0.01，SiHa組t=4.391，P<0.05；MMP9蛋白HeLa組t=3.430，P<0.05，SiHa組t=4.082，P<0.05，圖4)。2.5轉(zhuǎn)染Rab11siRNA對(duì)宮頸癌細(xì)胞骨架蛋白R(shí)ac1定位的影響Rab11siRNA組與si-negativecontrol組相比，分布在細(xì)胞周圍的紅色熒光強(qiáng)度降低，集中在細(xì)胞膜前端上的紅色熒光明顯減少(紅色熒光為分布在細(xì)胞膜上的Rac1蛋白，藍(lán)色熒光為細(xì)胞核DAPI染色，圖5)。圖3Rab11siRNA對(duì)宮頸癌HeLa/SiHa細(xì)胞遷移能力的影響Fig.3EffectofRab11siRNAoncervicalcancerHeLa/SiHacellmigrationcapacity圖4Rab11siRNA對(duì)宮頸癌HeLa/SiHa細(xì)胞中Rac1、MMP2和MMP9蛋白表達(dá)的影響Fig.4EffectofRab11siRNAonRac1,MMP2andMMP9expressioninhumancervicalcancerHeLa/SiHacell

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Ⅰb2期巨塊型宮頸癌術(shù)前不同治療方法的療效觀察[J]. 韓娜娜,邵文裕,劉開江,馬焱.  中國(guó)癌癥雜志. 2015(01)



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