目的:子癇前期（preeclampsia,PE）是引起我國孕產婦死亡的主要原因之一,能夠引起胎盤缺血缺氧,并伴隨多器官損傷、水腫、神經系統(tǒng)異常等并發(fā)癥。目前研究普遍認同引起子癇前期主要原因之一是螺旋小動脈重鑄不足,而滋養(yǎng)細胞的增殖、遷移、侵襲、分化及凋亡等行為在螺旋小動脈重鑄過程中起到了至關重要的作用。因此滋養(yǎng)細胞的功能在子癇前期的發(fā)生和發(fā)展中扮演著重要的角色。漿細胞瘤可變易位基因1（plasmacytoma variant translocation 1,PVT1）屬于長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）。近年來多項研究表明PVT1參與了腫瘤細胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲等多種生物學過程,但是其在重度子癇前期中對滋養(yǎng)細胞的影響及機制,目前尚未見研究及報道。因此本實驗通過檢測正常妊娠孕婦的胎盤組織和重度子癇前期孕婦的胎盤組織中PVT1的基因表達量,分析二者之間表達量的差異,然后在人絨毛膜滋養(yǎng)層細胞系（HTR8-S/Vneo）中,通過抑制或者過表達PVT1,來驗證PVT1在重度子癇前期的影響及機制。方法:（1）選取15例重度子癇前期孕產婦為實驗組,另選... 

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正常胎盤組織與重度子癇前期胎盤組織中PVT1的表達量

第3章實驗結果24注：圖3.1qRT-PCR檢測正常胎盤組織與重度子癇前期胎盤組織中PVT1基因的表達水平。用Mean±SD表示結果，每組至少3個獨立重復。**p<0.01表示與Normal相比。3.2抑制PVT1對滋養(yǎng)細胞的增殖、凋亡、遷移的影響3.2.1siRNA-PVT1干擾效率的檢測首先，我們用siRNA-PVT1#1、siRNA-PVT1#2、siRNA-PVT1#3分別轉染細胞，通過qRT-PCR檢測PVT1的mRNA水平來評估沉默效率，結果顯示轉染48h后siRNA-PVT1#3對PVT1的抑制效率最明顯（圖3.2），因此下面實驗我們選用siRNA-PVT1#3進行細胞轉染。圖3.2不同siRNA對PVT1的抑制效率注：圖3.2用siRNA-PVT1#1、siRNA-PVT1#2、siRNA-PVT1#3分別刺激HTR8-S/Vneo細胞48h。48h后，通過qRT-PCR檢測PVT1mRNA表達量的變化。用Mean±SD表示結果，每組至少3個獨立重復。*p<0.05表示與NC相比。3.2.2siRNA-PVT1對滋養(yǎng)細胞增殖的影響用siRNA-PVT1處理HTR8-S/Vneo48h，48h后通過CCK8檢測發(fā)現(xiàn)抑制PVT1后能夠顯著抑制滋養(yǎng)細胞的增殖（圖3.3A）。EDU染色結果和CCK8結果一致（圖3.3B）。通過Westernblot檢測細胞

第3章實驗結果25增殖的標記物PCNA的蛋白水平。結果顯示，抑制PVT1后能夠顯著抑制PCNA的蛋白表達（圖3.3C&D）。以上實驗結果表明，抑制PVT1能夠顯著抑制細胞增殖。圖3.3轉染siRNA-PVT148h后對細胞增殖的影響注：siRNA-PVT1刺激HTR8-S/Vneo細胞48h。圖3.3A,CCK8檢測HTR8-S/Vneo細胞的增殖。圖3.3B,EDU染色檢測HTR8-S/Vneo細胞的增殖。圖3.3C,Westernblot檢測增殖蛋白PCNA，以GAPDH為內參。圖3.3D,增殖蛋白PCNA的蛋白條帶的灰度分析結果。用Mean±SD表示結果，每組至少3個獨立重復。*p<0.05表示與NC相比。3.2.3siRNA-PVT1對滋養(yǎng)細胞遷移的影響為了研究PVT1對HTR8-S/Vneo細胞遷移的影響，用siRNA-PVT1處理HTR8-S/Vneo細胞24h，通過劃痕實驗發(fā)現(xiàn)與NC相比，抑制PVT1可顯著抑制HTR-8-S/Vneo細胞的遷移（圖3.4A&B）。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]miR-34a-5p通過調控CDK6表達和PI3K/AKT信號通路調節(jié)滋養(yǎng)層細胞的增殖、浸潤和凋亡[J]. 李勤,許娟秀.  南方醫(yī)科大學學報. 2020(01)
[2]長鏈非編碼RNA-TCL6在胎盤植入組織中的表達水平及對滋養(yǎng)層細胞活性和遷移的影響[J]. 王瑞,吳淑貞,李楊,陳娟.  實用醫(yī)學雜志. 2019(13)
[3]子癇前期發(fā)病機制與臨床治療研究進展[J]. 李可,朱大偉,陳建昆,韓健,鄭秀慧,郭建新,李力.  解放軍醫(yī)學雜志. 2019(05)
[4]miRNA和lncRNA及相關信號轉導通路對滋養(yǎng)細胞浸潤功能的影響及其機制[J]. 唐希陽,史安平,趙首捷,朱曉明.  國際婦產科學雜志. 2019(01)
[5]漿細胞瘤多樣異位基因1在卵巢癌組織中的表達及其對SKOV3細胞惡性生物學行為的影響[J]. 李曉珍,任琛琛,劉靈,劉泇希.  中國腫瘤生物治療雜志. 2018(02)
[6]不同孕周重度子癇前期對母嬰及圍產結局的影響[J]. 王利曉.  現(xiàn)代診斷與治療. 2017(11)
[7]子宮螺旋動脈重鑄與病理妊娠[J]. 董勝雯,郭潔,宋殿榮.  國際婦產科學雜志. 2017(02)
[8]長鏈非編碼RNA PVT1在腫瘤中的研究進展[J]. 萬里,馬天云,王朝霞.  臨床腫瘤學雜志. 2016(06)

碩士論文
[1]LncRNA PVT1在胃癌中的表達與臨床意義研究[D]. 任顯顯.石河子大學 2017
[2]LncRNA PVT1靶向p300調控p53的轉錄活性影響肝癌細胞HepG2對5-Fu和DDP的藥物敏感性[D]. 黃楠.南華大學 2017



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