目的:子癇前期（preeclampsia,PE）是引起我國孕產(chǎn)婦死亡的主要原因之一,能夠引起胎盤缺血缺氧,并伴隨多器官損傷、水腫、神經(jīng)系統(tǒng)異常等并發(fā)癥。目前研究普遍認(rèn)同引起子癇前期主要原因之一是螺旋小動脈重鑄不足,而滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、分化及凋亡等行為在螺旋小動脈重鑄過程中起到了至關(guān)重要的作用。因此滋養(yǎng)細(xì)胞的功能在子癇前期的發(fā)生和發(fā)展中扮演著重要的角色。漿細(xì)胞瘤可變易位基因1（plasmacytoma variant translocation 1,PVT1）屬于長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）。近年來多項(xiàng)研究表明PVT1參與了腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲等多種生物學(xué)過程,但是其在重度子癇前期中對滋養(yǎng)細(xì)胞的影響及機(jī)制,目前尚未見研究及報道。因此本實(shí)驗(yàn)通過檢測正常妊娠孕婦的胎盤組織和重度子癇前期孕婦的胎盤組織中PVT1的基因表達(dá)量,分析二者之間表達(dá)量的差異,然后在人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞系（HTR8-S/Vneo）中,通過抑制或者過表達(dá)PVT1,來驗(yàn)證PVT1在重度子癇前期的影響及機(jī)制。方法:（1）選取15例重度子癇前期孕產(chǎn)婦為實(shí)驗(yàn)組,另選... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

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正常胎盤組織與重度子癇前期胎盤組織中PVT1的表達(dá)量

第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果24注：圖3.1qRT-PCR檢測正常胎盤組織與重度子癇前期胎盤組織中PVT1基因的表達(dá)水平。用Mean±SD表示結(jié)果，每組至少3個獨(dú)立重復(fù)。**p<0.01表示與Normal相比。3.2抑制PVT1對滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移的影響3.2.1siRNA-PVT1干擾效率的檢測首先，我們用siRNA-PVT1#1、siRNA-PVT1#2、siRNA-PVT1#3分別轉(zhuǎn)染細(xì)胞，通過qRT-PCR檢測PVT1的mRNA水平來評估沉默效率，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染48h后siRNA-PVT1#3對PVT1的抑制效率最明顯（圖3.2），因此下面實(shí)驗(yàn)我們選用siRNA-PVT1#3進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。圖3.2不同siRNA對PVT1的抑制效率注：圖3.2用siRNA-PVT1#1、siRNA-PVT1#2、siRNA-PVT1#3分別刺激HTR8-S/Vneo細(xì)胞48h。48h后，通過qRT-PCR檢測PVT1mRNA表達(dá)量的變化。用Mean±SD表示結(jié)果，每組至少3個獨(dú)立重復(fù)。*p<0.05表示與NC相比。3.2.2siRNA-PVT1對滋養(yǎng)細(xì)胞增殖的影響用siRNA-PVT1處理HTR8-S/Vneo48h，48h后通過CCK8檢測發(fā)現(xiàn)抑制PVT1后能夠顯著抑制滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖（圖3.3A）。EDU染色結(jié)果和CCK8結(jié)果一致（圖3.3B）。通過Westernblot檢測細(xì)胞

第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果25增殖的標(biāo)記物PCNA的蛋白水平。結(jié)果顯示，抑制PVT1后能夠顯著抑制PCNA的蛋白表達(dá)（圖3.3C&D）。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，抑制PVT1能夠顯著抑制細(xì)胞增殖。圖3.3轉(zhuǎn)染siRNA-PVT148h后對細(xì)胞增殖的影響注：siRNA-PVT1刺激HTR8-S/Vneo細(xì)胞48h。圖3.3A,CCK8檢測HTR8-S/Vneo細(xì)胞的增殖。圖3.3B,EDU染色檢測HTR8-S/Vneo細(xì)胞的增殖。圖3.3C,Westernblot檢測增殖蛋白PCNA，以GAPDH為內(nèi)參。圖3.3D,增殖蛋白PCNA的蛋白條帶的灰度分析結(jié)果。用Mean±SD表示結(jié)果，每組至少3個獨(dú)立重復(fù)。*p<0.05表示與NC相比。3.2.3siRNA-PVT1對滋養(yǎng)細(xì)胞遷移的影響為了研究PVT1對HTR8-S/Vneo細(xì)胞遷移的影響，用siRNA-PVT1處理HTR8-S/Vneo細(xì)胞24h，通過劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與NC相比，抑制PVT1可顯著抑制HTR-8-S/Vneo細(xì)胞的遷移（圖3.4A&B）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miR-34a-5p通過調(diào)控CDK6表達(dá)和PI3K/AKT信號通路調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖、浸潤和凋亡[J]. 李勤,許娟秀.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020(01)
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碩士論文
[1]LncRNA PVT1在胃癌中的表達(dá)與臨床意義研究[D]. 任顯顯.石河子大學(xué) 2017
[2]LncRNA PVT1靶向p300調(diào)控p53的轉(zhuǎn)錄活性影響肝癌細(xì)胞HepG2對5-Fu和DDP的藥物敏感性[D]. 黃楠.南華大學(xué) 2017



本文編號：3486707