中性粒細胞作為一種重要的固有免疫細胞,在機體免疫調節(jié)及免疫防御等方面發(fā)揮重要作用。近年來研究發(fā)現(xiàn),中性粒細胞具有不均一性和可塑性的特點,如在膿毒血癥、腫瘤等疾病中,其半衰期延長并呈現(xiàn)出多種細胞表型。關于中性粒細胞的研究主要集中在炎癥與感染,人們對其在生殖系統(tǒng)中的作用研究起步較晚。2014年有研究顯示,在子宮蛻膜組織中存在一群少量的、具有中性粒細胞表型的功能獨特的細胞群,稱作蛻膜中性粒細胞（decidual neutrophils,dNs）。dNs具有促進血管生成和血管重塑的作用,并可通過免疫抑制介導母-胎界面免疫耐受,但其表面特征分子仍未確定。激活素 A（Activin A）作為轉化生長因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）超家族成員之一,在機體生理及病理過程中均扮演著重要角色。同時作為重要的性激素調節(jié)蛋白,Activin A在妊娠期女性外周血及子宮蛻膜組織中表達水平顯著升高。研究表明,Activin A可通過自分泌或旁分泌的方式調控多種免疫細胞的功能。課題組前期工作發(fā)現(xiàn),中性粒細胞也是激活素應答細胞,根據(jù)激活素ⅡA型受體（ActRⅡA）表達情... 

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Activins在免疫細胞中的調控作用

第3章實驗結果19第3章實驗結果3.1人及小鼠中性粒細胞激活素IIA型受體表達實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)，ActivinA可以調控人及小鼠中性粒細胞活性[66,67]，因此，為了進一步確定中性粒細胞是否存在表達激活素受體的亞群，實驗采用流式細胞術檢測了健康女性（24～30周歲）及雌性BALB/c小鼠（8～10周齡）外周血中性粒細胞表達ActRIIA（IIA）的比例。實驗采用CD16+CD66b+作為人外周血中性粒細胞標志，Ly6G+CD11b+作為小鼠外周血中性粒細胞標志。檢測結果顯示，正常女性（24～30周歲）外周血CD16+CD66b+中性粒細胞占白細胞總數(shù)的58.3%5.57%（圖3.1A），雌性BALB/c小鼠（8～10周齡）外周血Ly6G+CD11b+中性粒細胞占白細胞總數(shù)的12.4%1.74%（圖3.1B）。此結果與文獻報道的人外周血中性粒細胞占白細胞總數(shù)50%～70%，以及小鼠外周血中性粒細胞占白細胞總數(shù)10%～25%的結果一致[8,9]。研究還顯示，ActRIIA陽性的人外周血中性粒細胞（CD16+CD66b+IIA+）亞群占人中性粒細胞總數(shù)的37.3%4.77%（圖3.1A），ActRIIA陽性的小鼠外周血中性粒細胞（Ly6G+CD11b+IIA+）亞群占小鼠中性粒細胞總數(shù)的20.2%2.57%（圖3.1B）。上述結果表明，人和小鼠中性粒細胞均存在表達ActRIIA的亞群。圖3.1流式細胞術分析人和小鼠外周血IIA+中性粒細胞亞群

第3章實驗結果20Figure3.1AnalysisofIIA+neutrophilsubsetinhumanandmouseperipheralbloodbyflowcytometry.(A)PercentageofIIA+neutrophilsubsetinperipheralbloodCD16+CD66b+neutrophilsinnormalwomenwasexaminedbyflowcytometry.(B)PercentageofIIA+neutrophilsubsetinperipheralbloodLy6G+CD11b+neutrophilsinnormalfemalemicewasexaminedbyflowcytometry.Theflowchartistheresultofatypicalexperiment.Atleasteightwomenandfemalemicewereexamined.3.2小鼠妊娠早期ActivinA表達水平變化妊娠期女性血漿ActivinA水平與健康未孕女性相比上升了10倍以上，而且從妊娠開始到妊娠38周左右一直在增加。但是，妊娠小鼠ActivinA水平變化是否與人類一致，以及ActivinA水平變化是否與妊娠期母體中性粒細胞比例變化有關，仍缺乏明確闡述。因此，為了確定小鼠妊娠期ActivinA水平變化，與中性粒細胞在外周血和子宮蛻膜組織中的比例變化關系，實驗建立了BALB/c小鼠妊娠模型，首先確認小鼠妊娠期外周血ActivinA水平變化是否與人類一致。3.2.1小鼠妊娠期血漿ActivinA水平變化為了探究BALB/c小鼠妊娠期血漿ActivinA水平變化，我們采用ELISA的方法檢測正常未孕小鼠（8～10周齡）和Ed4.5、6.5、8.5及10.5妊娠小鼠血漿ActivinA水平。結果顯示，Ed6.5、8.5及10.5妊娠小鼠血漿ActivinA水平均明顯高于正常未孕小鼠（圖3.2），統(tǒng)計學差異顯著（P<0.01），表明妊娠小鼠外周血ActivinA水平變化與人類妊娠女性外周血ActivinA變化趨勢一致。圖3.2BALB/c小鼠妊娠期血漿ActivinA水平變化


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