目的:BAP18是一種重要的雄激素受體的輔調(diào)節(jié)因子,可以上調(diào)AR介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄,已報(bào)道在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。但在非腫瘤性疾病,例如以高雄激素血癥為主要病理特征的多囊卵巢綜合征中,BAP18的功能需要進(jìn)一步探究。本研究的目的是:1.明確BAP18在多囊卵巢綜合征患者顆粒細(xì)胞中的表達(dá)情況及與疾病的關(guān)系;2.闡明BAP18是否通過影響雄激素受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄影響多囊卵巢綜合征的發(fā)生發(fā)展;3.探究BAP18影響AR介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄的機(jī)制;4.探究BAP18與AR本身表達(dá)之間的聯(lián)系及原因;5.探索BAP18在顆粒細(xì)胞中發(fā)揮的生物學(xué)功能。研究方法:1.通過收集多囊卵巢綜合征女性與正常非PCOS女性的顆粒細(xì)胞,探究兩組中BAP18的表達(dá)量,及BAP18的表達(dá)與PCOS疾病病例指標(biāo)之間的聯(lián)系;2.利用蛋白免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)（co-IP）明確在顆粒細(xì)胞中BAP18是否與AR相互作用,利用免疫熒光實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證BAP18與AR在顆粒細(xì)胞中的定位,然后利用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證BAP18對AR介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄活性的影響;3.試圖深入探討B(tài)AP18影響雄激素信號通路的分子機(jī)制。尋找BAP18在顆粒細(xì)胞中可能影... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

PCOS組顆粒細(xì)胞中BAP18的mRNA表達(dá)低于對照組

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文26囊卵巢綜合征患者顆粒細(xì)胞中BAP18的蛋白表達(dá)顯著低于在對照組女性顆粒細(xì)胞中的表達(dá)（p=0.0378）。圖1.2PCOS組顆粒細(xì)胞中BAP18的蛋白表達(dá)低于對照組A：Westernblotting實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證BAP18在多囊卵巢綜合征患者卵巢顆粒細(xì)胞組織中和對照組患者卵巢顆粒細(xì)胞組織中的蛋白表達(dá)情況。PCOS組15例，PCOS為分組名稱，編號1-15；對照組15例，Control為分組名稱，編號1-15，GAPDH為內(nèi)參。B：應(yīng)用imageJ軟件計(jì)算BAP18和GAPDH的條帶灰度值，BAP18和對應(yīng)GAPDH灰度值的比值作為該樣本BAP18蛋白水平的相對表達(dá)量，匯總對照組和PCOS組的相對表達(dá)量，Studentt-test檢驗(yàn)，*p=0.0378。3.1.3BAP18的表達(dá)與各生理指標(biāo)的關(guān)系收集兩組患者的多囊卵巢綜合征相關(guān)生理指標(biāo)，標(biāo)定BAP18的蛋白平均表達(dá)后規(guī)定高于平均值為高表達(dá)，反之為低表達(dá)。以卡方檢驗(yàn)為檢驗(yàn)方法，統(tǒng)計(jì)分析BAP18蛋白表達(dá)水平與患者各項(xiàng)生理指標(biāo)的聯(lián)系。結(jié)果顯示BAP18表達(dá)水平與多囊卵巢綜合征相關(guān)生理指標(biāo)密切相關(guān)。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果在表1中展示，BAP18的表達(dá)與患者LH/FSH、T和AMH的水平密切相關(guān)，并且這些指標(biāo)與雄激素受體信號通路相關(guān)，提示我們BAP18可能成為預(yù)測PCOS的潛在指標(biāo)。

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文283.2BAP18與AR相互作用并上調(diào)AR介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄3.2.1BAP18可以與AR相互作用由于BAP18和多囊卵巢綜合征中關(guān)鍵指標(biāo)都有密切聯(lián)系，而這些指標(biāo)或多或少都與雄激素或雄激素受體通路相關(guān)，我們將關(guān)注BAP18是否與雄激素受體相關(guān)。首先，我們通過蛋白質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在顆粒細(xì)胞細(xì)胞系KGN中，BAP18和AR都有表達(dá)且BAP18可以與內(nèi)源性的雄激素受體相互作用。圖2.1在顆粒細(xì)胞細(xì)胞系KGN中BAP18與AR存在相互作用A-B：蛋白質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)顯示BAP18與AR之間的蛋白相互作用。input指10%全蛋白量，IgG指抗體陽性對照。3.2.2BAP18與AR在顆粒細(xì)胞中的定位BAP18和AR在顆粒細(xì)胞中都有表達(dá)，為進(jìn)一步明確BAP18在顆粒細(xì)胞中的定位和AR在顆粒細(xì)胞中的定位，我們設(shè)計(jì)安排了免疫熒光共定位實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在KGN細(xì)胞中，無論是否加入DHT，BAP18都主要在細(xì)胞核中表達(dá)，在細(xì)胞漿中表達(dá)很少。而AR在不加DHT刺激的情況下細(xì)胞核細(xì)胞漿均勻分布，在加入DHT時(shí)AR主要定位于細(xì)胞核中。而在另外一種顆粒細(xì)胞細(xì)胞系COV434中，在不加DHT的條件下，BAP18和AR在細(xì)胞漿中的分布均大于細(xì)胞核。而加入DHT的條件下，BAP18在細(xì)胞核中的分布多于細(xì)胞漿，AR蛋白處于均質(zhì)分布。以上的結(jié)果表明，BAP18和AR在顆粒細(xì)胞中存在共定位。


本文編號：3452432