發(fā)布時(shí)間：2021-09-16 23:16

　　目的:探討miR-101表達(dá)對(duì)上皮性卵巢癌耐藥細(xì)胞SKOV3/DDP行為活性的影響及相關(guān)作用機(jī)制。方法:上調(diào)SKOV3/DDP細(xì)胞中miR-101表達(dá)水平。RT-PCR法檢測(cè)SKOV3/DDP細(xì)胞中miR-101 mRNA表達(dá)水平,CCK-8檢測(cè)SKOV3/DDP細(xì)胞的順鉑敏感性,劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SKOV3/DDP細(xì)胞的遷移力,Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SKOV3/DDP細(xì)胞侵襲力,Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SKOV3/DDP細(xì)胞凋亡率,Western blot法檢測(cè)SKOV3/DDP細(xì)胞p-ERK1/2、波形蛋白（Vimentin）、鈣粘蛋白E（E-cadherin）及Caspase-3蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:與各對(duì)照組比較,miR-101組SKOV3/DDP細(xì)胞miR-101mRNA表達(dá)水平明顯升高（P<0.05）,順鉑敏感性明顯增加,IC50顯著降低（P<0.05）;劃痕距離明顯增寬（P<0.05）,透膜細(xì)胞數(shù)顯著減少（P<0.05）;細(xì)胞凋亡率顯著增高（P<0.05）,p-ERK1/2及Vimentin蛋白表達(dá)水平降低（P<0... 

【文章來源】：現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展. 2017,26(08)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

各組SKOV3/DDP細(xì)胞miＲ-101相對(duì)表達(dá)量*P＜0．05vs陰性對(duì)照組、轉(zhuǎn)染試劑組、空白質(zhì)粒組

ANOVA)，兩兩比較采用SNK檢驗(yàn)。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2．1miＲ-101轉(zhuǎn)染效果細(xì)胞轉(zhuǎn)染24h后，miＲ-101組miＲ-101mＲNA表達(dá)量較各對(duì)照組顯著增高(F=470．41，P＜0．05)。表明轉(zhuǎn)染成功，且轉(zhuǎn)染效率較高。見圖1。2．2miＲ-101對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞順鉑敏感性的影響miＲ-101組SKOV3/DDP細(xì)胞的順鉑IC50(34．78±3．39)與陰性對(duì)照組(60．97±1．09)、脂質(zhì)體組(58．09±2．67)、空白質(zhì)粒組(55．76±4．11)分別比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=43．75，P＜0．05);miＲ-101組SKOV3/DDP細(xì)胞的順鉑IC50明顯降低。見圖2。2．3miＲ-101對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞遷移力的影響miＲ-101組劃痕24、48h劃痕距離顯著寬于各對(duì)照組(P＜0．05);陰性對(duì)照組、轉(zhuǎn)染試劑組、空白質(zhì)粒組SKOV3/DDP細(xì)胞的劃痕距離分別比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。見表1。2．4miＲ-101對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞侵襲力的影響miＲ-101組SKOV3/DDP細(xì)胞透膜數(shù)量(158．67±9．71)與陰性對(duì)照組(235．00±12．00)、轉(zhuǎn)染試劑組(241．67±10．50)、空白質(zhì)粒組(235．33±13．58)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=37．75，P＜0．05)。見圖3。2．5miＲ-101對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞p-EＲK1/2、Vim-entin及E-cadherin蛋白表達(dá)水平的影響與陰性對(duì)照組、轉(zhuǎn)染試劑組、空白質(zhì)粒組比較，miＲ-101組SKOV3/DDP細(xì)胞中p-EＲK1/2、Vimentin蛋白表達(dá)水平顯著降低，E-cadherin蛋白表達(dá)顯著增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。見表2、圖4。圖1各組SKOV3/DDP細(xì)胞miＲ-101相對(duì)表達(dá)量*P＜0．05vs陰性對(duì)照組、轉(zhuǎn)染試劑組、空白質(zhì)粒組圖2不同濃度順鉑作用下各組SKOV3/DDP細(xì)胞存活率*P＜0．05vs陰性對(duì)照組、轉(zhuǎn)染試劑組、空白質(zhì)粒組表1SKOV3/DDP細(xì)胞劃痕距離比較(x珋±s)組別劃痕距離(μm)0h24h48h陰性對(duì)

圖3各組SKOV3/DDP細(xì)胞侵襲情況A:陰性對(duì)照組;B:轉(zhuǎn)染試劑組;C:空白質(zhì)粒組;D:miＲ-101組圖4各組SKOV3/DDP細(xì)胞Vimentin、E-cadherin及p-EＲK1/2表蛋白達(dá)水平2．6miＲ-101對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞凋亡的影響miＲ-101組SKOV3/DDP細(xì)胞凋亡率(23．06±1．58)較各對(duì)照組明顯顯著增加(F=218．04，P＜0．05);陰性對(duì)照組(10．15±0．36)、轉(zhuǎn)染試劑組(10．32±0．89)、空白質(zhì)粒組(10．09±0．97)SKOV3/DDP細(xì)胞凋亡率分別比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。見圖5。2．7miＲ-101對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞caspase-3蛋白表達(dá)水平的影響miＲ-101組SKOV3/DDP細(xì)胞caspase-3表達(dá)水平(1．36±0．08)較各對(duì)照組顯著升高(F=68．45，P＜0．05);陰性對(duì)照組(0．82±0．06)、轉(zhuǎn)染試劑組(0．83±0．05)、空白質(zhì)粒組(0．84±0．07)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。見圖6。圖5各組SKOV3/DDP細(xì)胞流式圖圖6各組SKOV3/DDP細(xì)胞caspase-3蛋白表達(dá)水平3討論miＲNAs主要在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控目的基因的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化及凋亡;參與個(gè)體的發(fā)育、機(jī)體代謝及腫瘤的形成與耐藥等。miＲNAs表達(dá)具有組織特異性，發(fā)揮著癌基因或抑癌基因的作用。人類miＲ-101包括miＲ-101-1和miＲ-101-2兩種前體ＲNA，分別位于人1號(hào)和9號(hào)染色體中，扮演者抑癌基因的角色。目前研究表明，miＲ-101的表達(dá)下調(diào)甚至缺失可導(dǎo)致機(jī)體組織細(xì)胞周期的紊亂，分裂增殖速率加快，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生，細(xì)胞遷移力、侵襲力的改變及細(xì)胞耐藥的形成［4－6］。Liu等［4］和Yin等［7］分別在上皮性卵巢癌耐藥細(xì)胞SKOV3/DDP及肺非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞中過表達(dá)miＲ-101，發(fā)現(xiàn)高表達(dá)水平的miＲ-101可促進(jìn)順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。本研究采用陽離子脂質(zhì)體上調(diào)miＲ-101在SKOV3/DDP細(xì)胞的表達(dá)水平，給予不?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3397471