目的:人子宮內(nèi)膜癌是最常見的女性生殖系統(tǒng)的惡性腫瘤之一。主要治療方法為手術(shù)、放療和藥物（化學(xué)藥物及激素）治療。目前針對子宮內(nèi)膜癌有效的靶向治療仍是臨床婦科醫(yī)生亟待思考的問題,其分子機(jī)制也成為近幾年的研究熱點(diǎn)。本研究旨在研究長鏈非編碼RNA PVT1能否調(diào)控子宮內(nèi)膜癌干細(xì)胞（ECSCs）的惡性生物學(xué)行為,進(jìn)一步深入分析可能的分子機(jī)制,即PVT1通過下調(diào)miR-195-5p進(jìn)而促進(jìn)FGFR1和FGF2的表達(dá),促進(jìn)ECSCs的惡性生物學(xué)行為。研究方法:首先應(yīng)用Real-time PCR方法和熒光原位雜交方法檢測PVT1和miR-195-5p在人子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá),并分析其與子宮內(nèi)膜癌臨床病例參數(shù)之間的關(guān)系。然后,利用雙熒光素酶基因報(bào)告系統(tǒng)檢測PVT1和miR-195-5p的靶向結(jié)合作用和結(jié)合位點(diǎn)。培養(yǎng)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Ishikawa、HEC-1A和RL95-2。之后在本實(shí)驗(yàn)中利用無血清懸浮法提取出Ishikawa-ECSCs。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)、免疫熒光和Real-time PCR方法檢測其對干細(xì)胞相關(guān)因子的表達(dá)。并通過CCK-8實(shí)驗(yàn)、EdU法檢測ECSCs的增殖能力,應(yīng)用Transwel... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

子宮內(nèi)膜癌組織中PVT1的表達(dá)A：Real-timePCR方法檢測子宮內(nèi)膜癌組織和正常子宮內(nèi)膜組織中PVT1表達(dá)水平；B：

圖 3 PVT1 和 miR-195-5p在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析A：TCGA 數(shù)據(jù)庫分析子宮內(nèi)膜癌組織中 PVT1 和 miR-195-5p 表達(dá)的相關(guān)性Pearson 相關(guān)性分析 Real-time PCR 方法檢測的 PVT1 和 miR-195-5p 在子宮內(nèi)膜達(dá)情況。3.4 PVT1 通過預(yù)測的結(jié)合位點(diǎn)靶向結(jié)合 miR-195-5p應(yīng)用生物信息學(xué)軟件 starBase v2.0，我們預(yù)測到 PVT1 存在 miR結(jié)合位點(diǎn)（圖 4A），進(jìn)一步我們應(yīng)用了雙熒光素酶基因報(bào)告系統(tǒng)檢測pmir-GLO-PVT1-WT+miR-195-5p-NC 組相比，pmir-GLO-PVT1-WT+m組的熒光素酶活性水平降低，且 pmir-GLO-PVT1-Mut+miR-195-5p 組酶活性水平恢復(fù)，提示 PVT1 通過預(yù)測的結(jié)合位點(diǎn)靶向結(jié)合 miR-14B）。

圖 3 PVT1 和 miR-195-5p在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析A：TCGA 數(shù)據(jù)庫分析子宮內(nèi)膜癌組織中 PVT1 和 miR-195-5p 表達(dá)的相關(guān)性；B：利用Pearson 相關(guān)性分析 Real-time PCR 方法檢測的 PVT1 和 miR-195-5p 在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)情況。3.4 PVT1 通過預(yù)測的結(jié)合位點(diǎn)靶向結(jié)合 miR-195-5p應(yīng)用生物信息學(xué)軟件 starBase v2.0，我們預(yù)測到 PVT1 存在 miR-195-5p 的結(jié)合位點(diǎn)（圖 4A），進(jìn)一步我們應(yīng)用了雙熒光素酶基因報(bào)告系統(tǒng)檢測發(fā)現(xiàn)，與pmir-GLO-PVT1-WT+miR-195-5p-NC 組相比，pmir-GLO-PVT1-WT+miR-195-5p組的熒光素酶活性水平降低，且 pmir-GLO-PVT1-Mut+miR-195-5p 組的熒光素酶活性水平恢復(fù)，提示 PVT1 通過預(yù)測的結(jié)合位點(diǎn)靶向結(jié)合 miR-195-5p（圖4B）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3396100