發(fā)布時(shí)間：2021-08-26 03:06

　　目的:研究miR-124對宮頸癌細(xì)胞放射敏感性的影響,并探索其潛在的作用機(jī)制。方法:qRT-PCR法檢測宮頸癌癌組織和癌旁正常組織,以及宮頸癌細(xì)胞系和正常宮頸細(xì)胞系中miR-124的表達(dá)水平。利用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測miR-124可能的靶基因,并通過雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證。再通過qRT-PCR和Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測miR-124對該靶基因的mRNA、蛋白表達(dá)的影響。免疫組化檢測宮頸癌癌組織和癌旁正常組織中該靶基因的表達(dá)。將人宮頸腺癌Hela和鱗癌Siha細(xì)胞分別分為三組,一組轉(zhuǎn)染miR-124 mimics,一組轉(zhuǎn)染陰性對照,一組轉(zhuǎn)染miR-124 inhibitor。qRT-PCR法檢測各組細(xì)胞miR-124和STAT3的表達(dá)。通過CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測miR-124異常表達(dá)對細(xì)胞增殖能力的影響,細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測miR-124異常表達(dá)對細(xì)胞遷移能力的影響,細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)檢測miR-124異常表達(dá)對細(xì)胞周期的影響。每組細(xì)胞經(jīng)相同劑量放射線處理后,通過克隆形成實(shí)驗(yàn)、Annexin V/PI流式細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)、Hoechst 33258細(xì)胞核染色實(shí)驗(yàn)等,檢測miR-124對宮頸癌細(xì)胞... 

【文章來源】：蚌埠醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

miR-124與STAT3的結(jié)合位點(diǎn)

qRT-PCR檢測miR-124的表達(dá)

圖 4 Hela 細(xì)胞中 miR-124 的直接靶基因檢測A、雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn) B、qRT-PCR 結(jié)果 C、Western Blot 結(jié)果3.2. Siha 細(xì)胞中 miR-124 靶基因的鑒定如圖 5A 所示，與 STAT3-3'UTR-wild 共轉(zhuǎn)染的 miR-124 mimics 轉(zhuǎn)染組和control 組細(xì)胞 RLU 值分別為 0.996±0.115、0.505±0.065，miR-124 可靶向抑制 STAT3-3'UTR-wild 表達(dá)（t＝6.446，P＝0.003）。而與 STAT3-3'UTR-mut 共轉(zhuǎn)染的 miR-124 mimics 轉(zhuǎn)染組和 control 組細(xì)胞 RLU 值分別為 0.982±0.064、0.949±0.066，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝0.623，P＞0.05）。圖 5B 顯示，相對于control 組，miR-124 mimics 轉(zhuǎn)染組細(xì)胞 STAT3 的 mRNA 表達(dá)水平明顯降低（t＝11.152，P＜0.001），而 miR-124 inhibitor 轉(zhuǎn)染組細(xì)胞 STAT3 的 mRNA 表達(dá)水平明顯升高（t＝-13.613，P＜0.001），且在 WesternBlot 實(shí)驗(yàn)中也得到類似結(jié)果，見圖 5C。這些結(jié)果均顯示，STAT3 是 Siha 細(xì)胞中 miR-124 的直接靶基因，miR-

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]第一部分：中晚期宮頸鱗狀細(xì)胞癌同步放化療敏感性相關(guān)血清microRNA的初步研究第二部分：早期宮頸神經(jīng)內(nèi)分泌癌32例臨床分析[D]. 王子毅.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2015
[2]中晚期宮頸鱗狀細(xì)胞癌同步放化療敏感性相關(guān)microRNAs的初步研究[D]. 胡金龍.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2012



本文編號：3363417