發(fā)布時間：2021-08-11 19:30

　　第一部分室溫酶解結(jié)合差速離心法分離培養(yǎng)子宮內(nèi)膜上皮細胞及評估目的：探索室溫酶解消化結(jié)合改良式差速離心法在分離培養(yǎng)子宮內(nèi)膜腺上皮細胞的可行性，為進一步探索子宮內(nèi)膜藥物干預(yù)時機的選擇提供依據(jù)。方法:1.收集子宮腺肌癥患者的子宮內(nèi)膜標(biāo)本,所得內(nèi)膜分為兩份，一份采用室溫酶解結(jié)合改良式差速離心法（改良組）分離，一份采用37℃水浴消化結(jié)合篩網(wǎng)法（對照組）分離，并用光鏡、免疫細胞化學(xué)圖像分析進行細胞鑒定、純度分析,分別比較兩種方法分離培養(yǎng)子宮內(nèi)膜腺上皮細胞的數(shù)目、純度。2.應(yīng)用光鏡觀察細胞形態(tài)學(xué)變化，應(yīng)用四甲基偶氮哩法（MTT）測定細胞不同時間點的OD值，繪制生長曲線。結(jié)果:1．改良組每1g內(nèi)膜組織可得到（9±1.7）×107/mL個腺上皮細胞，免疫細胞化學(xué)角蛋白表達陽性，純度達(97.8±0.002%；對照組可得到（3.9±0.78）×107個腺上皮細胞，角蛋白表達陽性，純度達(88.6±0.006%,改良組分離的腺上皮細胞數(shù)量和純度均明顯高于對照組（P＜0.05）。培養(yǎng)無一例發(fā)生污染。2．光鏡下觀察,兩組EEC外觀特征相似,細胞形態(tài)無差異，兩組細胞生長周期有顯著性差異，改良組細胞于15天開始衰退... 

【文章來源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

子宮內(nèi)膜上皮細胞不同時間生長形態(tài)

境變化對其影響不大，將體外分離培養(yǎng)的上皮細胞進行上述特異性標(biāo)志分子免疫細胞化學(xué)染色，進行細胞鑒定以及觀察原代培養(yǎng)的上皮細胞體外生長的情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，原代培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜腺上皮細胞呈Cytokeratin陽性表達，EEC胞漿被均染成棕黃色，陰性對照則僅見胞核呈藍色,胞漿陰性。采用免疫熒光方法對分離的細胞進一步鑒定，結(jié)果表明免疫熒光法陽性細胞的細胞質(zhì)呈綠色,染色后,在熒光顯微鏡下陰性細胞的細胞質(zhì)不顯色。

原代培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜腺上皮細胞呈Cytokeratin陽性表達，EEC胞漿被均染成棕黃色，陰性對照則僅見胞核呈藍色,胞漿陰性。采用免疫熒光方法對分離的細胞進一步鑒定，結(jié)果表明免疫熒光法陽性細胞的細胞質(zhì)呈綠色,染色后,在熒光顯微鏡下陰性細胞的細胞質(zhì)不顯色。A：對照組 B：改良組圖 1-2 子宮內(nèi)膜腺上皮細胞第 5 天角蛋白細胞免疫化學(xué)鑒定 (×200)A B

【參考文獻】：
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本文編號：3336757