目的探究醌茜素對(duì)宮頸癌Caski細(xì)胞的作用。方法體外培養(yǎng)人宮頸癌Caski細(xì)胞,用不同濃度醌茜素（0、1、4、12μmol/L）的醌茜素培養(yǎng)液對(duì)其進(jìn)行預(yù)處理,以5-氟尿嘧啶組（5μmol/L）作為陽(yáng)性對(duì)照。通過(guò)BrdU染色檢測(cè)Caski細(xì)胞增殖能力的變化;流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)Caski細(xì)胞凋亡;免疫熒光檢測(cè)微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3）含量; Western blot檢測(cè)增殖、凋亡、自噬以及PI3K通路磷酸化相關(guān)蛋白的表達(dá);注射CaSki細(xì)胞構(gòu)建移植瘤裸鼠模型并進(jìn)行體內(nèi)驗(yàn)證。結(jié)果與對(duì)照組（0μmol/L）相比,4μmol/L和12μmol/L醌茜素處理后的宮頸癌CaSki細(xì)胞增殖能力明顯減弱,BrdU陽(yáng)性細(xì)胞率明顯降低,Ki67蛋白的表達(dá)量也顯著下降。隨著醌茜素濃度增大,宮頸癌CaSki細(xì)胞凋亡率和Cleaved caspase-3的表達(dá)量逐漸升高,12μmol/L醌茜素處理組效果最為明顯。ATG5的表達(dá)量隨醌茜素濃度增加而逐漸降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值和p62的表達(dá)量逐漸增加,而且4μmol/L和12μmol/L醌茜素處理組與對(duì)照相比均具有顯著差異。與單獨(dú)使用自噬抑制劑3-MA處理相... 

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不同濃度醌茜素處理對(duì)宮頸癌CaSki細(xì)胞增殖能力的影響

不同濃度醌茜素處理對(duì)宮頸癌CaSki細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用

為了檢測(cè)不同濃度醌茜素對(duì)宮頸癌CaSki細(xì)胞自噬的影響,采用0、1、4、12 μmol/L醌茜素處理細(xì)胞,分別檢測(cè)自噬標(biāo)記分子ATG5、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ以及自噬底物p62變化。結(jié)果如圖3A顯示ATG5的表達(dá)水平隨醌茜素濃度增加而逐漸降低,而LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值卻是逐漸增大,p62的表達(dá)量逐漸增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=25.346,P=0.006;F=16.154,P=0.008;F=15.142,P=0.009)。因此醌茜素能夠促進(jìn)宮頸癌CaSki細(xì)胞自噬。免疫熒光檢測(cè)LC3的含量結(jié)果如圖3B所示:對(duì)照組、醌茜素12 μmol/L組、 3-MA組、3-MA+醌茜素12 μmol/L組單個(gè)細(xì)胞LC3斑點(diǎn)數(shù)分別為(3.12±0.16)、(29.33±0.87)、(1.02±0.12)、(6.45±0.67),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=85.34,P=0.000)。Western blot檢測(cè)LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表達(dá)情況,如圖3C所示,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=41.183,P=0.003)。單獨(dú)用自噬抑制劑3-MA處理后,顯示細(xì)胞自噬明顯被抑制,而當(dāng)12 μmol/L醌茜素和3-MA聯(lián)合處理Caski細(xì)胞時(shí),自噬作用又恢復(fù)了,表明高濃度醌茜素確實(shí)能促進(jìn)宮頸癌CaSki細(xì)胞自噬。圖4 3-MA與高劑量醌茜素處理對(duì)宮頸癌CaSki細(xì)胞PI3K通路磷酸化的影響

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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