本文關鍵詞：RBMS3在HPV16相關宮頸鱗癌發(fā)生中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景高危型人乳頭瘤病毒(high risk-human papillomaviruses, HR-HPVs)感染在宮頸癌發(fā)生中具有重要作用,其早期基因E7的持續(xù)表達是其致癌的關鍵,E7蛋白可通過多種途徑誘導細胞異常增殖。抑癌基因RNA結合基序單鏈相互作用蛋白3(RNA binding motif, single-stranded-interacting protein 3, RBMS3)在正常組織廣泛表達,而在癌細胞系和原發(fā)性腫瘤中表達顯著降低。本課題組經Agilent人基因表達譜芯片分析,發(fā)現(xiàn)沉默E7表達后,RBMS3表達上調。目的以HPV16 E7表達陽性的宮頸鱗癌組織、宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)組織、宮頸鱗狀上皮組織、宮頸癌細胞株(宮頸癌SiHa細胞)以及HPV16E7表達陰性的宮頸鱗癌組織、CIN組織、宮頸鱗狀上皮組織、宮頸癌細胞株(宮頸癌C33-A細胞)為研究對象,探討HPV16相關宮頸癌發(fā)生中RBMS3的表達及作用,以期為進一步研究HPV16相關宮頸癌防治方法提供科學依據。方法1.通過Western blotting方法檢測王RBMS3在HPV16 E7表達陽性的宮頸癌SiHa細胞和HPV16 E7表達陰性的宮頸癌C33-A細胞中的表達。2.通過免疫組織化學(immunohistochemistry, IHC)染色方法檢測IBMS3在HPV16 E7表達陽性的宮頸鱗狀上皮組織、C1N組織、宮頸鱗癌組織和HPV16E7表達陰性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織、宮頸鱗癌組織中的表達,并分析二者表達的關系。3.常規(guī)培養(yǎng)宮頸癌C33-A細胞,提取細胞總RNA并定量,通過逆轉錄-聚合酶鏈反應(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法擴增RBMS3基因編碼序列(coding sequence, CDS),構建真核表達重組質粒pcDNA3.1-RBMS3并鑒定,經脂質體介導將pcDNA3.1-RBMS3重組質粒轉染HPV16 E7表達陽性的宮頸癌SiHa細胞,通過生長曲線、克隆形成率、Annexin V-FIT C/PI結合流式細胞術等方法觀察穩(wěn)定表達RBMS3對SiHa細胞增殖和凋亡的影響。結果1. Western blotting結果顯示：①GPV16 E7在宮頸癌C33-A細胞中不表達,而HPV16 E7在宮頸癌SiHa細胞中表達。②C33-A細胞中RBMS3的表達顯著高于SiHa細胞(P0.01)。2.IHC結果顯示：RBMS3在HPV16E7表達陽性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織和宮頸鱗癌組織中的表達均分別顯著低于其在HPV16 E7表達陰性的宮頸鱗狀上皮組織、C1N組織和宮頸鱗癌組織癌組織中的表達,二者表達呈負相關(P0.01)3.①細胞生長曲線和倍增時間計算結果顯示：SiHa-RBMS3細胞的生長速度較SiHa-vect細胞的生長速度顯著減慢(P0.01),倍增時間顯著延長(P0.01)。②平板克隆形成實驗結果顯示：SiHa-RBMS3細胞的克隆形成均數顯著低于SiHa-vect細胞的克隆形成均數(P0.01),克隆體積也較小。③Annexin V-FITC/PI結合流式細胞術結果顯示：SiHa-RBMS3細胞凋亡均數明顯高于SiHa-vectt細胞(P0.01),SiHa-RBMS3細胞SiHa-vect細胞凋亡細胞百分比分別為：11.543%和0.267%。結論1.E7和RBMS3在HPV16 E7表達陽性和陰性的宮頸癌細胞株和不同病變階段宮頸組織中的表達呈負相關關系。2. RBMS3穩(wěn)定表達對HPV16 E7表達陽性的宮頸癌SiHa細胞的增殖能力具有抑制作用,對其凋亡具有促進作用。
【關鍵詞】：宮頸鱗癌 人乳頭瘤病毒 RNA結合基序單鏈相互作用蛋白3基因 增殖 凋亡
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 第一部分 HPV16 E7與RBMS3表達的關系12-32
• 1 材料與方法12-21
• 2 結果21-32
• 第二部分 RBMS3穩(wěn)定表達對SiHa細胞增殖和凋亡能力的影響32-47
• 1 材料與方法32-41
• 2 結果41-47
• 討論47-50
• 結論50-51
• 參考文獻51-54
• 綜述：RNA結合基序單鏈相互作用蛋白RBMS3的研究進展54-62
• 參考文獻59-62
• 附錄 英文縮略詞62-64
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況64-65
• 致謝65-66
• 個人簡歷66

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