本文關(guān)鍵詞：RBMS3在HPV16相關(guān)宮頸鱗癌發(fā)生中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景高危型人乳頭瘤病毒(high risk-human papillomaviruses, HR-HPVs)感染在宮頸癌發(fā)生中具有重要作用,其早期基因E7的持續(xù)表達(dá)是其致癌的關(guān)鍵,E7蛋白可通過(guò)多種途徑誘導(dǎo)細(xì)胞異常增殖。抑癌基因RNA結(jié)合基序單鏈相互作用蛋白3(RNA binding motif, single-stranded-interacting protein 3, RBMS3)在正常組織廣泛表達(dá),而在癌細(xì)胞系和原發(fā)性腫瘤中表達(dá)顯著降低。本課題組經(jīng)Agilent人基因表達(dá)譜芯片分析,發(fā)現(xiàn)沉默E7表達(dá)后,RBMS3表達(dá)上調(diào)。目的以HPV16 E7表達(dá)陽(yáng)性的宮頸鱗癌組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)組織、宮頸鱗狀上皮組織、宮頸癌細(xì)胞株(宮頸癌SiHa細(xì)胞)以及HPV16E7表達(dá)陰性的宮頸鱗癌組織、CIN組織、宮頸鱗狀上皮組織、宮頸癌細(xì)胞株(宮頸癌C33-A細(xì)胞)為研究對(duì)象,探討HPV16相關(guān)宮頸癌發(fā)生中RBMS3的表達(dá)及作用,以期為進(jìn)一步研究HPV16相關(guān)宮頸癌防治方法提供科學(xué)依據(jù)。方法1.通過(guò)Western blotting方法檢測(cè)王RBMS3在HPV16 E7表達(dá)陽(yáng)性的宮頸癌SiHa細(xì)胞和HPV16 E7表達(dá)陰性的宮頸癌C33-A細(xì)胞中的表達(dá)。2.通過(guò)免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry, IHC)染色方法檢測(cè)IBMS3在HPV16 E7表達(dá)陽(yáng)性的宮頸鱗狀上皮組織、C1N組織、宮頸鱗癌組織和HPV16E7表達(dá)陰性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織、宮頸鱗癌組織中的表達(dá),并分析二者表達(dá)的關(guān)系。3.常規(guī)培養(yǎng)宮頸癌C33-A細(xì)胞,提取細(xì)胞總RNA并定量,通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法擴(kuò)增RBMS3基因編碼序列(coding sequence, CDS),構(gòu)建真核表達(dá)重組質(zhì)粒pcDNA3.1-RBMS3并鑒定,經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)將pcDNA3.1-RBMS3重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HPV16 E7表達(dá)陽(yáng)性的宮頸癌SiHa細(xì)胞,通過(guò)生長(zhǎng)曲線、克隆形成率、Annexin V-FIT C/PI結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)等方法觀察穩(wěn)定表達(dá)RBMS3對(duì)SiHa細(xì)胞增殖和凋亡的影響。結(jié)果1. Western blotting結(jié)果顯示：①GPV16 E7在宮頸癌C33-A細(xì)胞中不表達(dá),而HPV16 E7在宮頸癌SiHa細(xì)胞中表達(dá)。②C33-A細(xì)胞中RBMS3的表達(dá)顯著高于SiHa細(xì)胞(P0.01)。2.IHC結(jié)果顯示：RBMS3在HPV16E7表達(dá)陽(yáng)性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織和宮頸鱗癌組織中的表達(dá)均分別顯著低于其在HPV16 E7表達(dá)陰性的宮頸鱗狀上皮組織、C1N組織和宮頸鱗癌組織癌組織中的表達(dá),二者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P0.01)3.①細(xì)胞生長(zhǎng)曲線和倍增時(shí)間計(jì)算結(jié)果顯示：SiHa-RBMS3細(xì)胞的生長(zhǎng)速度較SiHa-vect細(xì)胞的生長(zhǎng)速度顯著減慢(P0.01),倍增時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P0.01)。②平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：SiHa-RBMS3細(xì)胞的克隆形成均數(shù)顯著低于SiHa-vect細(xì)胞的克隆形成均數(shù)(P0.01),克隆體積也較小。③Annexin V-FITC/PI結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示：SiHa-RBMS3細(xì)胞凋亡均數(shù)明顯高于SiHa-vectt細(xì)胞(P0.01),SiHa-RBMS3細(xì)胞SiHa-vect細(xì)胞凋亡細(xì)胞百分比分別為：11.543%和0.267%。結(jié)論1.E7和RBMS3在HPV16 E7表達(dá)陽(yáng)性和陰性的宮頸癌細(xì)胞株和不同病變階段宮頸組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。2. RBMS3穩(wěn)定表達(dá)對(duì)HPV16 E7表達(dá)陽(yáng)性的宮頸癌SiHa細(xì)胞的增殖能力具有抑制作用,對(duì)其凋亡具有促進(jìn)作用。
【關(guān)鍵詞】：宮頸鱗癌 人乳頭瘤病毒 RNA結(jié)合基序單鏈相互作用蛋白3基因 增殖 凋亡
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 第一部分 HPV16 E7與RBMS3表達(dá)的關(guān)系12-32
• 1 材料與方法12-21
• 2 結(jié)果21-32
• 第二部分 RBMS3穩(wěn)定表達(dá)對(duì)SiHa細(xì)胞增殖和凋亡能力的影響32-47
• 1 材料與方法32-41
• 2 結(jié)果41-47
• 討論47-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 綜述：RNA結(jié)合基序單鏈相互作用蛋白R(shí)BMS3的研究進(jìn)展54-62
• 參考文獻(xiàn)59-62
• 附錄 英文縮略詞62-64
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況64-65
• 致謝65-66
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷66

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本文編號(hào)：324433