發(fā)布時間：2021-06-19 12:45

　　目的:研究G蛋白偶聯(lián)受體30（G protein-coupled receptor 30,GPR30）對子宮內(nèi)膜癌細胞增殖及凋亡能力的影響,并探討其可能的作用機制。方法:將靶向GPR30的shRNA（shRNA-GPR30）或攜帶有GPR30全基因的慢病毒（LV-GPR30）分別導(dǎo)入子宮內(nèi)膜癌Ishikawa和KLE細胞中,構(gòu)建沉默GPR30和過表達GPR30的細胞株,然后用蛋白質(zhì)印跡法檢測轉(zhuǎn)染效率。采用CCK-8法檢測沉默或過表達GPR30對子宮內(nèi)膜癌細胞增殖能力的影響,采用FCM法檢測沉默或過表達GPR30對子宮內(nèi)膜癌細胞凋亡能力的影響。采用實時熒光定量PCR及蛋白質(zhì)印跡法檢測沉默或過表達GPR30對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（glucose-regulated protein 78,GRP78）和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的未折疊蛋白反應(yīng)信號通路關(guān)鍵分子蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK）、肌醇需求酶1（inositol-requiring enzyme 1,IRE1）、活化轉(zhuǎn)錄因子6（... 

【文章來源】：腫瘤. 2020,40(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【部分圖文】：

CCK-8檢測沉默（A和B）或過表達GPR30(C和D）對Ishikawa和KLE細胞增殖能力的影響

FCM法檢測結(jié)果(圖3)顯示,與Control和shRNA-NC組相比,轉(zhuǎn)染shRNA-GPR30-1、shRNA-GPR30-2的Ishikawa和KLE細胞早期凋亡率明顯增加(Ishikawa細胞中2條sh RNA對應(yīng)的t值分別為13.26和11.31,P值均<0.01;KLE細胞中2條shRNA對應(yīng)的t值分別為30.26和28.19,P值均<0.01),說明沉默GPR30能明顯促進Ishikawa和KLE細胞的凋亡能力;感染LV-GPR30的細胞早期凋亡率均比Vector組和Control組明顯降低(Ishikawa和KLE細胞中t值分別為9.06和16.45,P值均<0.01),說明過表達GPR30基因能明顯抑制Ishikawa和KLE細胞的凋亡能力。2.4 沉默或過表達GPR30對Ishikawa和KLE細胞中GRP78、PERK、IRE1、ATF6 mRNA和蛋白表達水平的影響

實時熒光定量PCR及蛋白質(zhì)印跡法檢測結(jié)果顯示,與Control和shRNA-NC組相比,Ishikawa和KLE細胞轉(zhuǎn)染shRNA-GPR30-1、shRNA-GPR30-2后GRP78、PERK、IRE1、ATF6 mRNA(圖4A)和蛋白(圖4B)表達水平均明顯下調(diào)(P值均<0.01)。與之相反,與Vector和Control組相比,Ishikawa和KLE細胞感染LV-GPR30后GRP78、PERK、IRE1、ATF6 mRNA(圖4A)和蛋白(圖4B)表達水平均明顯上調(diào)(P值均<0.01)。這一結(jié)果說明,沉默GPR30表達可下調(diào)子宮內(nèi)膜癌中GRP78、PERK、IRE1和ATF6的表達,抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑;而過表達GPR30可上調(diào)子宮內(nèi)膜癌中GRP78、PERK、IRE1和ATF6的表達,激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑。3 討 論

【參考文獻】：
期刊論文
[1]子宮內(nèi)膜癌組織中G蛋白偶聯(lián)受體30和葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78的表達及其臨床意義[J]. 葉佳,呂蓓,張陽,張金偉,馬錦琪,張俊.  上海醫(yī)學(xué). 2019(06)
[2]不同子宮內(nèi)膜癌細胞系中G蛋白耦聯(lián)受體30mRNA及蛋白表達觀察[J]. 葉佳,楊曉清,盛楠,馬勤宜,張玉泉.  山東醫(yī)藥. 2016(19)
[3]G蛋白偶聯(lián)受體30在子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細胞中的表達及亞細胞定位[J]. 葉佳,張沐,馬勤宜,徐云釗,張玉泉.  腫瘤. 2011(11)



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