研究背景子癇前期（preeclampsia,PE）作為妊娠期特有的疾病,以高血壓和蛋白尿為主要特征,全球發(fā)病率為4%-5%。其發(fā)病機(jī)制主要有胎盤淺著床、氧化應(yīng)激、血管內(nèi)皮損傷和免疫調(diào)節(jié)異常等,但子癇前期的確切病因仍未完全闡明。長鏈非編碼RNA（long Noncoding RNA,lncRNA）是一類長度大于200個核苷酸,但不編碼蛋白質(zhì)的RNA。既往研究發(fā)現(xiàn),異常表達(dá)的lncRNA與子癇前期發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),推測lncRNA可能通過影響滋養(yǎng)細(xì)胞功能在子癇前期中發(fā)揮重要作用,為子癇前期提供前瞻性的診斷和治療。我們對9例重癥早發(fā)子癇前期胎盤和32例正常胎盤進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序,發(fā)現(xiàn)lncRNA SH3PXD2A-AS1在子癇前期胎盤中顯著高表達(dá)。過表達(dá)lncRNA SH3PXD2A-AS1后抑制滋養(yǎng)細(xì)胞遷移、侵襲和增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡;敲除則相反。通過RNA pulldown和蛋白質(zhì)譜發(fā)現(xiàn)93個lncRNA SH3PXD2A-AS1特異結(jié)合的蛋白,包括12個轉(zhuǎn)錄因子。進(jìn)一步,通過數(shù)據(jù)庫預(yù)測轉(zhuǎn)錄因子的靶基因,構(gòu)建TF-Targets調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及與胎盤測序差異表達(dá)基因交集分析,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子CCCTC位... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：140 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－３?ＬｎｃＲＮＡ?ＳＨ３ＰＸＤ２Ａ－ＡＳ１在胎盤中表達(dá)量與孕婦血壓具有相關(guān)性??Ｆｉｇｕｒｅｌ－３?Ｔｈｅ?ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ??

０進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)用均值士標(biāo)準(zhǔn)差（Ｍｅａｎ?±?Ｓ．Ｄ）??表示。兩獨(dú)立樣本間比較使用ｔ檢驗或Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ檢驗，＊代表／？＜〇．〇５，＊＊??代表／Ｋ０．０１，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。??３．３結(jié)果??３．３．１?Ｌｎｔ側(cè)Ａ?ＳＨ３ＰＸＤ２Ａ－ＡＳ１主要位于細(xì)胞核??我們通過核質(zhì)分離實驗發(fā)現(xiàn)，人約９２％的ＩｎｃＲＮＡ?ＳＨ３ＰＸＤ２Ａ－ＡＳ１位于細(xì)??胞核，只有８％的ＩｎｃＲＮＡ?ＳＨ３ＰＸＤ２Ａ－ＡＳ１位于細(xì)胞質(zhì)，分別以Ｕ６和ＧＡＰＤＨ??作為細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的標(biāo)志物（圖３－１Ａ）。此外，我們通過免疫原位雜交??（ＦＩＳＨ）實驗，發(fā)現(xiàn)ＩｎｃＲＮＡ?ＳＨ３ＰＸＤ２Ａ－ＡＳ１大多數(shù)位于細(xì)胞核，１８ｓ代表細(xì)??胞質(zhì)的標(biāo)志物（圖３－１Ｂ）。以ｈ結(jié)果提示，ｌｎｃＲＮＡＳＨ３ＰＸＤ２Ａ－ＡＳｌ?能參１?ｊ??細(xì)胞轉(zhuǎn)錄過程從而發(fā)揮作用。??Ａ?Ｂ??ｎ?ｊ?ｕ?Ｃｙ３?Ｈｏｅｃｈｓｔ?Ｍｅｒｇｅｄ??５１２〇?■?Ｃｙｔｏｐｌａｓｍ?Ｌ?＞?…：」：?．＇?ｉ?｜ｉ?■－；?ｓ??ｍｉ??ｉ２：：ｌ?１１?Ｓ＇ＥＢＢＨ９??ＧＡＰＤＨ?Ｕ６?ＳＨ３ＰＸＤ２Ａ－ＡＳ１?的??Ｑ：??圖３－ｌ?ＬｎｃＲＮＡ?ＳＨ３ＰＸＤ２Ａ－ＡＳ１在滋養(yǎng)細(xì)胞的定位分布??Ｆｉｇｕｒｅ３－ｌ?Ｔｈｅ?ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ＩｎｃＲＮＡ?ＳＨ３ＰＸＤ２Ａ－ＡＳ１?ｉｎ?ＨＴＲ８／ＳＶｎｃｏ??Ａ：核質(zhì)分離實驗檢測丨ｎｃＲＮＡ?ＳＨ３ＰＸＤ２Ａ－ＡＳ１的定位．ＧＡＰＤＨ為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)參，Ｕ６為細(xì)??胞核內(nèi)參：Ｂ：?ＦＩＳＨ實驗驗證丨ｎｃＲＮＡ?ＳＨ３ＰＸＤ２Ａ－ＡＳ１分布，ｌｎｃＲＮＡ－ｌ８Ｓ為

文???Ａ?Ｂ??Ｔｈｅ?ｏｖｅｒｌａｐ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｔｈｅ?ｔａｒｇｅｔｓ?ｏｆ?ＳＨ３ＰＸＤ２Ａ－ＡＳ１?ｂｉｎｄｉｎｇ?ＴＦｓ?ａｎｄ?ＤＥＧｓ?丨ｎ?ＥＯＳＰＥ??－－：?ＵＴＰ１８?ＰＷＰ１?ＣＬＩＰ１??＾?ＨＮＲＰＭ?ＤＤＸ４１?ＬＭ０７?＾???ＤＤＸ５４?＿??Ｓ?ｆ＾?＾?；；?（７＾?ｖ?－）?（Ｍ?■?，?－?；；?，７?．?＾?；??■?Ｔａｒｇｅｔｓ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ?ｆａｃｔｏｒ??■?ＤＥＧｓ?ｉｎ?ＥＯＳＰＥ??圖３－３?ＬｍｒＲＮＡ?ＳＨ３丨》Ｘ丨）２Ａ－ＡＳ１結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子－靶基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及與胎盤測序差異表達(dá)??基因交集??Ｆｉｇｕｒｅ３－３?Ｔｈｅ?ＳＨ３ＰＸＤ２Ａ－ＡＳ１?ｂｉｎｄｉｎｇ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ?ｆａｃｔｏｒ（ＴＦ）?－Ｔａｒｇｅｔｓ?ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ?ｎｅｔｗｏｒｋ??ａｎｄ?ｏｖｅｒｌａｐ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｔｈｅ?ｔａｒｇｅｔｓ?ａｎｄ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ｇｅｎｅｓ?（ＤＥＧｓ）?ｉｎ?ＥＯＳＰＥ??Ａ：?ＬｎｃＲＮＡＳＨ３ＰＸＤ２Ａ－ＡＳ丨結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子－靶基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)；Ｂ：?ＬｎｃＲＮＡＳＨ３ＰＸＤ２Ａ－??ＡＳｌ結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子靶基因與胎盤測序差異表達(dá)基因交集；Ｃ：?ＣＴＣＦ靶基因與胎盤測序差??異表達(dá)基因交集。??３Ｊ．４?ＲＩＰ?實驗驗證?ＩｎｃＲＮＡ?ＳＨ３ＰＸＤ２Ａ－ＡＳ１?與ＣＴＣＦ?結(jié)合??通過?ＲＩＰ?富集和?ｑＲＴ－ＰＣＲ?檢測，發(fā)現(xiàn)?ＩｎｃＲＮＡ?ＳＨ３ＰＸＤ２Ａ－ＡＳ１?與?ＣＴＣＦ??結(jié)合（圖３－４Ａ）。進(jìn)一步，我們在滋養(yǎng)細(xì)胞ＨＴＲ８／ＳＶｎｅｏ中過表達(dá)和敲除??Ｉｎ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]長鏈非編碼RNA HOTAIR調(diào)節(jié)PE滋養(yǎng)細(xì)胞功能的研究[J]. 鄒艷芬,孫麗洲.  四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2015(01)
[2]Small nucleolar RNAs （snoRNAs） as potential non-invasive biomarkers for early cancer detection[J]. Wen-Dan Chen,Xiao-Feng Zhu.  Chinese Journal of Cancer. 2013(02)



本文編號：3229794