背景宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤,近年來發(fā)病率有逐漸上升的趨勢,在亞洲人群中有著較高的發(fā)病率。在我國,宮頸癌日益成為威脅女性生命健康的嚴(yán)重問題。宮頸癌致死的主要原因是部分患者在確診時(shí)已經(jīng)達(dá)到晚期,并且在治療過程中對(duì)放療、化療產(chǎn)生耐受和抵抗,甚至產(chǎn)生轉(zhuǎn)移,因此亟需尋找一種新的治療方法。腫瘤細(xì)胞對(duì)于葡萄糖的利用優(yōu)先選擇有氧糖酵解的方式進(jìn)行代謝,即Warburg效應(yīng),這將導(dǎo)致葡萄糖的消耗增加,產(chǎn)生大量的乳酸,另外,腫瘤細(xì)胞異常利用谷氨酰胺也會(huì)導(dǎo)致乳酸的生成增加。這些能量代謝途徑都導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)乳酸含量增加,為避免酸中毒,腫瘤細(xì)胞通過膜蛋白將乳酸外排入其微環(huán)境,造成微環(huán)境的酸化,而這將促進(jìn)腫瘤多種惡性生物學(xué)行為的產(chǎn)生,包括組織侵襲、轉(zhuǎn)移,新生血管生成和對(duì)缺氧的反應(yīng),此外,乳酸誘導(dǎo)酸化的腫瘤微環(huán)境（pH 6.0—6.5）可抑制宿主局部抗癌免疫力。已經(jīng)有越來越多的證據(jù)表明靶向腫瘤能量代謝重編程可以為腫瘤治療提供一種有效的治療方法。單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)體（Monocarboxylate transporters,MCTs）家族包括了參與乳酸和其他單羧酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)的質(zhì)膜蛋白,而MCT4是其中重要的一員。通常認(rèn)為乳酸/H+... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

westernblot檢測MCT4蛋白在Hcer-Epic、Hela、Siha細(xì)胞中的表達(dá)水平

2.2 篩選出沉默 MCT4 適宜濃度的 siRNA為了達(dá)到更好的沉默效果并避免脫靶效應(yīng)，我們?cè)O(shè)計(jì)了兩條 siRNA，即siMCT4#1、siMCT4#2（序列詳見表 1）。為了篩選出適宜的轉(zhuǎn)染濃度，將siMCT4#1、siMCT4#2 分別以 50 nM、100 nM、150 nM、200 nM 和 300 nM 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 Hela、Siha 細(xì)胞。如圖 2.1 所示，48h 后，Western blot 結(jié)果顯示內(nèi)參蛋白 β-actin 條帶灰度值較為一致，Hela 組中空白對(duì)照組（Ctrl）和陰性對(duì)照組（siNC）條帶灰度值相比無顯著差異（P＞0.05），隨著轉(zhuǎn)染 siRNA#1 濃度的增加，MCT4 蛋白條帶的灰度值逐漸減小，但 200 nM 組和 300 nM 組 MCT4 條帶灰度值無明顯差異。同樣，如圖 2.2 所示，siRNA#2 沉默 MCT4 基因時(shí)，隨著轉(zhuǎn)染濃度從 50 nM 到 300 nM的增加，MCT4 條帶灰度值逐漸減小。在 Siha 組(如圖 2.3、2.4)中也呈現(xiàn)出與Hela 類似的沉默效果。由此可見，在一定范圍內(nèi)（50 nM--300 nM），隨著轉(zhuǎn)染濃度的增加，沉默效果逐漸增強(qiáng)，但 200 nM 組和 300 nM 組未見明顯差異。為達(dá)到較好的沉默效果并減少 Lipo3000 對(duì)細(xì)胞的毒性，兩條序列 siRNA#1、siRNA#2 都選用 200 nM 的濃度來進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

westernblot檢測不同濃度的siMCT4#2沉默Hela細(xì)胞中MCT4的效果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Mechanisms of regulation of PFKFB expression in pancreatic and gastric cancer cells[J]. Oleksandr H Minchenko,Katsuya Tsuchihara,Dmytro O Minchenko,Andreas Bikfalvi,Hiroyasu Esumi.  World Journal of Gastroenterology. 2014(38)



本文編號(hào)：3215142