目的:探討M1型巨噬細(xì)胞源外泌體對(duì)卵泡膜細(xì)胞活力的影響及其作用機(jī)制。方法:采用脂多糖（LPS）處理Raw264.7小鼠巨噬細(xì)胞,構(gòu)建M1型巨噬細(xì)胞模型及巨噬細(xì)胞-卵泡膜細(xì)胞共培養(yǎng)體系。超速離心法分離巨噬細(xì)胞分泌的外泌體;通過電鏡、Western blot和納米流式檢測(cè)儀鑒定外泌體。體外分離培養(yǎng)小鼠卵泡膜細(xì)胞,與PKH67熒光標(biāo)記的外泌體共孵育,觀察卵泡膜細(xì)胞攝取外泌體的情況。CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力,流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期分布,q PCR及Western blot檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子1B（CDKN1B）的表達(dá)。結(jié)果:在巨噬細(xì)胞-卵泡膜細(xì)胞共培養(yǎng)體系中,LPS誘導(dǎo)的M1型巨噬細(xì)胞通過外泌體增強(qiáng)卵泡膜細(xì)胞活力。電鏡、Western blot及納米流式檢測(cè)結(jié)果顯示,巨噬細(xì)胞源外泌體被成功分離。PKH67標(biāo)記的外泌體與卵泡膜細(xì)胞共孵育實(shí)驗(yàn)證實(shí)卵泡膜細(xì)胞能攝取大量巨噬細(xì)胞源外泌體。這些外泌體可增強(qiáng)卵泡膜細(xì)胞的活力,使卵泡膜細(xì)胞G₀/G₁期比例下降,S期比例升高,且卵泡膜細(xì)胞CDKN1B的m RNA及蛋白相對(duì)表達(dá)量均明顯低于對(duì)照組。結(jié)論:卵... 

【文章來源】：中國病理生理雜志. 2020,36(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    1 動(dòng)物
    2 主要試劑和儀器
    3 主要方法
        3.1 巨噬細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2 卵泡膜細(xì)胞的提取、培養(yǎng)和鑒定
        3.3 巨噬細(xì)胞與卵泡膜細(xì)胞共培養(yǎng)
        3.4 Raw264.7巨噬細(xì)胞外泌體的提取
        3.5 Raw264.7巨噬細(xì)胞外泌體的鑒定
        3.6 實(shí)驗(yàn)分組
        3.7 外泌體熒光標(biāo)記示蹤
        3.8 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力
        3.9 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期分布
        3.1 0 qPCR實(shí)驗(yàn)
        3.1 1 Western blot實(shí)驗(yàn)
    4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    1小鼠卵泡膜細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定
    2 M1型巨噬細(xì)胞對(duì)卵泡膜細(xì)胞細(xì)胞活力的影響
    3巨噬細(xì)胞來源外泌體的鑒定
    4 巨噬細(xì)胞分泌的外泌體能被卵泡膜細(xì)胞攝取
    6 M1型巨噬細(xì)胞源外泌體對(duì)卵泡膜細(xì)胞的細(xì)胞周期分布和CDKN1B表達(dá)的影響
5 M1型巨噬細(xì)胞源外泌體對(duì)卵泡膜細(xì)胞活力的影響
討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體用于大鼠脊髓損傷修復(fù)的初步探索[J]. 王琳,裴雙,郭斌,路雁惠,李燕飛,段冉冉,姚要兵,陳雪梅,賈延劼.  中國病理生理雜志. 2018(05)
[2]小檗堿增強(qiáng)表柔比星誘導(dǎo)T24細(xì)胞G0/G1期阻滯的作用機(jī)制[J]. 詹雄宇,陳奇彪,呂秀秀,秦曉平,陳建帆,黃保元,黃君,卓育敏.  中國病理生理雜志. 2017(06)
[3]PCOS患者卵泡液微環(huán)境中的亞急性炎癥反應(yīng)[J]. 楊星,黃睿,梁曉燕.  中國病理生理雜志. 2015(09)



本文編號(hào)：3156607