目的:本研究旨在通過比較高級別漿液性卵巢癌原位灶和轉(zhuǎn)移灶之間硬度的差異,進(jìn)一步研究組織機(jī)械力在卵巢癌惡性進(jìn)展方面的作用,揭示其主要的調(diào)控機(jī)制,并進(jìn)一步探究改變組織硬度對卵巢癌惡性進(jìn)展的作用,從而為卵巢癌的治療提供新的方向。方法:原子力顯微鏡檢測配對高級別漿液性卵巢癌原位灶和轉(zhuǎn)移灶之間楊氏模量的差異;體外制備聚丙烯酰胺凝膠（PA膠）,模擬不同硬度的培養(yǎng)條件下,對細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為進(jìn)行觀察和檢測;表達(dá)譜芯片篩選硬度調(diào)控的關(guān)鍵性基因;體內(nèi)運(yùn)用化學(xué)藥物改變組織硬度,觀察卵巢癌惡性進(jìn)展的變化。結(jié)果:通過對八對配對高級別漿液性卵巢癌原位灶和轉(zhuǎn)移灶進(jìn)行楊氏模量的檢測以及細(xì)胞外膠原成分以及賴氨酰氧化酶（LOX）表達(dá)的分析,證實(shí)卵巢癌網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移灶較原位灶相比硬度更大,且存在更為顯著的纖維化現(xiàn)象;體外通過PA膠模擬不同硬度的培養(yǎng)環(huán)境,發(fā)現(xiàn)卵巢癌細(xì)胞在較硬的基質(zhì)上生長時,其遷移、侵襲及增殖等惡性表型均明顯強(qiáng)于在較軟的基質(zhì)上培養(yǎng)時;通過表達(dá)譜芯片分析,篩選出受機(jī)械力調(diào)控的基因TAGLN,且證明TAGLN不僅能調(diào)控卵巢癌的惡性進(jìn)展,對細(xì)胞骨架的張力也具有敏感性;研究發(fā)現(xiàn)Src與TAGLN之間存在相互調(diào)控關(guān)系,且... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

卵巢癌網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移灶硬度明顯高于原位灶

圖 2. 基質(zhì)硬度促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞惡性表型。(a)相差顯微鏡下拍攝不同硬度stiff: 10 kPa）下培養(yǎng)的 SK-OV-3 和 ES-2 細(xì)胞的形態(tài)白光圖。比例尺：件分析白光圖下不同硬度培養(yǎng)的 SK-OV-3 和 ES-2 細(xì)胞的表面積。*p

3.基質(zhì)硬度調(diào)控卵巢癌細(xì)胞的力學(xué)信號通路。(a) Western blot 分析不用硬度培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi) p-Src (Try416), p-Src (Try527), Src, p-FAK (Y397), p-FAK (Y861), FAK 以APDH 蛋白的表達(dá)水平。GAPDH 作為內(nèi)參基因。(b) 免疫熒光分析不同硬度培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi) p-FAK (Y397)的表達(dá)水平。綠色：p-FAK (Y397)，藍(lán)色：DAPI（細(xì)胞核例尺：20 μm。(c) 免疫熒光分析不同硬度培養(yǎng)下的細(xì)胞內(nèi) p-MLC2 (S19)的表達(dá)。綠色：p-MLC2 (S19)，藍(lán)色：DAPI（細(xì)胞核）。比例尺：20 μm。(d) Western b析不用硬度培養(yǎng)下的細(xì)胞內(nèi) ROCK1, Rac1, Cdc42, ROCK2, p-MLC2 (S19), MLhoA 以及 GAPDH 蛋白的表達(dá)水平。GAPDH 作為內(nèi)參基因。RhoA pull down 的方測活性 RhoA 的表達(dá)情況。


本文編號：3138033