過表達NDRG1通過調(diào)控VEGF/sFlt-1軸增強缺氧條件下滋養(yǎng)細胞的促血管形成能力
發(fā)布時間：2021-04-08 05:12
目的探討缺氧條件下N-myc下游調(diào)節(jié)基因1（NDRG1）過表達對滋養(yǎng)細胞HTR-8/SVneo促血管形成能力的影響。方法構(gòu)建NDRG1過表達慢病毒載體并感染HTR-8/SVneo細胞,建立NDRG1基因穩(wěn)定過表達的HTR-8/SVneo細胞株,隨后采用低氧（1%O2）干預(yù)24 h。qRT-PCR檢測缺氧后細胞中NDRG1、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1（sFlt-1）mRNA表達水平;Western blot檢測細胞中NDRG1、基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）和MMP-9等蛋白表達水平;ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中VEGF和sFlt-1蛋白含量;小管形成實驗檢測細胞體外促血管形成能力;Transwell實驗檢測細胞侵襲能力。結(jié)果缺氧可誘導(dǎo)HTR-8/SVneo細胞中NDRG1、VEGF、sFlt-1等mRNA表達,并促進NDRG1蛋白表達及VEGF和sFlt-1蛋白的分泌,還可抑制MMP-2、MMP-9等蛋白表達以及降低細胞體外促血管形成能力和侵襲能力。NDRG1過表達可促進低氧條件下HTR-8/SVneo細胞VEGF mRNA的...
【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020,55(05)北大核心
【文章頁數(shù)】：6 頁
【部分圖文】：
各組細胞中NDRG1 mRNA和蛋白表達水平
qRT-PCR實驗結(jié)果顯示,與blank組比較,缺氧處理后Hpx組細胞中VEGF和sFlt-1 mRNA水平均增加(t=39.792、33.130,P<0.05);與Hpx組與Hpx+Vector組比較,Hpx+pCMV6-NDRG1組細胞中VEGF mRNA水平再次增加(F=967.729,P<0.001),而sFlt-1 mRNA水平則降低(F=143.156,P<0.001)。見圖2A。ELISA檢測結(jié)果顯示,與blank組比較,缺氧處理后Hpx組細胞分泌的VEGF和sFlt-1蛋白水平升高(t=16.572、33.322,P<0.05);與Hpx組與Hpx+Vector組比較,Hpx+pCMV6-NDRG1組細胞分泌的VEGF蛋白水平再次升高(F=290.098,P<0.001),而分泌的sFlt-1 蛋白水平則降低(F=270.398,P<0.001)。見圖2B。2.3 過表達NDRG1增強缺氧條件下HTR-8/SVneo細胞的促血管形成能力
小管形成實驗結(jié)果顯示,blank組、Hpx組、Hpx+Vector組和Hpx+pCMV6-NDRG1組HUVEC細胞血管成管數(shù)量依次為(21.67±3.24)、(6.67±2.08)、(6.33±2.08)和(69.67±6.02)個,與blank組比較,缺氧處理后Hpx組細胞培養(yǎng)上清液誘導(dǎo)的HUVEC細胞血管成管數(shù)量降低(t=6.784,P<0.05);與Hpx組和Hpx+Vector組比較,Hpx+pCMV6-NDRG1組細胞培養(yǎng)上清誘導(dǎo)HUVEC細胞血管成管數(shù)量增加(F=266.007,P<0.001)。見圖3。2.4 過表達NDRG1促進缺氧條件下HTR-8/SVneo細胞的侵襲
【參考文獻】：
期刊論文
[1]氧化應(yīng)激對胎盤生命的影響[J]. 國林林,趙慧棟,胡海燕. 國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志. 2019(02)
[2]子癇前期的兩大平衡失調(diào)與血管功能障礙[J]. 陳琴,宋成文. 華南國防醫(yī)學(xué)雜志. 2018(05)
[3]子癇前期孕婦子宮螺旋動脈超聲參數(shù)與胎盤中血管新生、細胞凋亡的相關(guān)性研究[J]. 覃菊芳. 中國婦幼保健. 2018(04)
[4]體外缺氧誘導(dǎo)子癇前期滋養(yǎng)細胞模型優(yōu)化及代謝組學(xué)鑒定[J]. 楊曉濤,韓頂立,Philip N.Baker,漆洪波,童超,楊竹. 重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2017(08)
[5]VEGF及其受體SFLT-1水平與重度子癇前期孕婦新生兒結(jié)局的關(guān)系[J]. 李玉芳,歐彩娟,彭麗平,曾艷花,吳雪琴. 中國婦幼健康研究. 2017(02)
[6]Effect of hypoxia on expression of placental trophoblast cells SATB1 and β-catenin and its correlation with the pathogenesis of preeclampsia[J]. Qiang Wu,Gang Wu,Jing-Xiang Li. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2016(06)
[7]缺氧對滋養(yǎng)細胞sFlt-1及VEGF基因及蛋白表達的影響[J]. 周瓊,喬福元,劉海意,吳媛媛,龔洵. 生殖與避孕. 2010(05)
本文編號：3124916
【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020,55(05)北大核心
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【部分圖文】：
各組細胞中NDRG1 mRNA和蛋白表達水平
qRT-PCR實驗結(jié)果顯示,與blank組比較,缺氧處理后Hpx組細胞中VEGF和sFlt-1 mRNA水平均增加(t=39.792、33.130,P<0.05);與Hpx組與Hpx+Vector組比較,Hpx+pCMV6-NDRG1組細胞中VEGF mRNA水平再次增加(F=967.729,P<0.001),而sFlt-1 mRNA水平則降低(F=143.156,P<0.001)。見圖2A。ELISA檢測結(jié)果顯示,與blank組比較,缺氧處理后Hpx組細胞分泌的VEGF和sFlt-1蛋白水平升高(t=16.572、33.322,P<0.05);與Hpx組與Hpx+Vector組比較,Hpx+pCMV6-NDRG1組細胞分泌的VEGF蛋白水平再次升高(F=290.098,P<0.001),而分泌的sFlt-1 蛋白水平則降低(F=270.398,P<0.001)。見圖2B。2.3 過表達NDRG1增強缺氧條件下HTR-8/SVneo細胞的促血管形成能力
小管形成實驗結(jié)果顯示,blank組、Hpx組、Hpx+Vector組和Hpx+pCMV6-NDRG1組HUVEC細胞血管成管數(shù)量依次為(21.67±3.24)、(6.67±2.08)、(6.33±2.08)和(69.67±6.02)個,與blank組比較,缺氧處理后Hpx組細胞培養(yǎng)上清液誘導(dǎo)的HUVEC細胞血管成管數(shù)量降低(t=6.784,P<0.05);與Hpx組和Hpx+Vector組比較,Hpx+pCMV6-NDRG1組細胞培養(yǎng)上清誘導(dǎo)HUVEC細胞血管成管數(shù)量增加(F=266.007,P<0.001)。見圖3。2.4 過表達NDRG1促進缺氧條件下HTR-8/SVneo細胞的侵襲
【參考文獻】：
期刊論文
[1]氧化應(yīng)激對胎盤生命的影響[J]. 國林林,趙慧棟,胡海燕. 國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志. 2019(02)
[2]子癇前期的兩大平衡失調(diào)與血管功能障礙[J]. 陳琴,宋成文. 華南國防醫(yī)學(xué)雜志. 2018(05)
[3]子癇前期孕婦子宮螺旋動脈超聲參數(shù)與胎盤中血管新生、細胞凋亡的相關(guān)性研究[J]. 覃菊芳. 中國婦幼保健. 2018(04)
[4]體外缺氧誘導(dǎo)子癇前期滋養(yǎng)細胞模型優(yōu)化及代謝組學(xué)鑒定[J]. 楊曉濤,韓頂立,Philip N.Baker,漆洪波,童超,楊竹. 重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2017(08)
[5]VEGF及其受體SFLT-1水平與重度子癇前期孕婦新生兒結(jié)局的關(guān)系[J]. 李玉芳,歐彩娟,彭麗平,曾艷花,吳雪琴. 中國婦幼健康研究. 2017(02)
[6]Effect of hypoxia on expression of placental trophoblast cells SATB1 and β-catenin and its correlation with the pathogenesis of preeclampsia[J]. Qiang Wu,Gang Wu,Jing-Xiang Li. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2016(06)
[7]缺氧對滋養(yǎng)細胞sFlt-1及VEGF基因及蛋白表達的影響[J]. 周瓊,喬福元,劉海意,吳媛媛,龔洵. 生殖與避孕. 2010(05)
本文編號：3124916
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