目的:課題組前期研究發(fā)現(xiàn)TEM8在卵巢癌組織中高表達(dá),與卵巢癌患者不良預(yù)后有關(guān)。本研究構(gòu)建TEM8過表達(dá)和抑制表達(dá)卵巢癌細(xì)胞系模型,深入探討TEM8對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖、周期、凋亡、侵襲和遷移的影響及相關(guān)的分子機(jī)制。進(jìn)一步探究轉(zhuǎn)錄因子如何調(diào)控TEM8的表達(dá)及相關(guān)結(jié)合位點(diǎn),為尋找卵巢癌的生物標(biāo)記物和靶向治療提供理論依據(jù)。研究方法:1、利用Western blot檢測(cè)TEM8蛋白在4種卵巢癌細(xì)胞系（OVCAR3、SKOV3、A2780、CAOV3）的表達(dá)情況。構(gòu)建TEM8過表達(dá)和抑制表達(dá)的卵巢癌細(xì)胞系,qRT-PCR和Western blot驗(yàn)證TEM8的m RNA和蛋白水平的變化。利用MTT、流式細(xì)胞儀、劃痕、Transwell實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)TEM8基因差異表達(dá)前后,卵巢癌細(xì)胞增殖、周期、凋亡、侵襲和遷移能力的變化。Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)與上述生物學(xué)行為相關(guān)分子的變化。構(gòu)建裸鼠皮下移植瘤,探究TEM8過表達(dá)對(duì)裸鼠皮下移植瘤增殖的影響,并利用免疫組化的方法檢測(cè)TEM8和細(xì)胞核增殖相關(guān)核抗原Ki-67的表達(dá)。2、從UCSC Xena數(shù)據(jù)庫下載TCGA卵巢癌標(biāo)準(zhǔn)化RNAseq數(shù)據(jù),并通過G... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

TEM8蛋白在卵巢癌細(xì)胞系的表達(dá)情況

TEM8過表達(dá)和抑制表達(dá)卵巢癌細(xì)胞模型的構(gòu)建

中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文11A：Westernblot檢測(cè)TEM8蛋白的變化，B：TEM8的灰度值定量分析柱狀圖，C：qRT-PCR檢測(cè)TEM8mRNA的變化3.2TEM8對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖、周期和凋亡能力的影響通過MTT法檢測(cè)TEM8基因差異表達(dá)后，卵巢癌細(xì)胞增殖能力的變化。結(jié)果表明：與空白對(duì)照和陰性對(duì)照組相比，過表達(dá)組增殖能力明顯增加，抑制表達(dá)組增殖能力明顯降低，提示TEM8促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞增殖（圖1.3）。流式細(xì)胞儀檢測(cè)TEM8基因差異表達(dá)后，卵巢癌細(xì)胞周期和凋亡水平的變化。流式細(xì)胞周期結(jié)果表明：與空白對(duì)照和陰性對(duì)照組相比，過表達(dá)組G0/G1期比例明顯減少，抑制表達(dá)組G0/G1期比例明顯增加，說明TEM8促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞G0/G1期轉(zhuǎn)化（圖1.4）。流式細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與空白對(duì)照和陰性對(duì)照組相比，TEM8過表達(dá)組凋亡水平明顯減少，抑制表達(dá)組凋亡水平明顯增加。結(jié)果表明TEM8抑制卵巢癌細(xì)胞凋亡（圖1.5）。Westernblot檢測(cè)過表達(dá)和抑制表達(dá)組與增殖、周期和凋亡相關(guān)指標(biāo)的變化，結(jié)果表明：與空白對(duì)照和陰性對(duì)照組相比，過表達(dá)組Ki-67、cyclinD1、Bcl2/Bax表達(dá)明顯增高，上述分子在抑制表達(dá)組均降低（圖1.6）。提示TEM8通過上調(diào)Ki-67、cyclinD1、Bcl2/Bax的表達(dá)，促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞殖、G0/G1期轉(zhuǎn)化，抑制細(xì)胞凋亡。圖1.3TEM8基因差異表達(dá)后卵巢癌細(xì)胞增殖能力的變化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同分級(jí)NSCLC病灶內(nèi)FoxM1表達(dá)的變化及其與增殖、侵襲基因表達(dá)的相關(guān)性[J]. 張靜,熊琦,陶海濤,秦博宇,張國慶.  疑難病雜志. 2019(05)
[2]微小RNA-664a-3p在乳腺癌組織的表達(dá)及對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[J]. 張沛,岳青芬,侯青霞,韓聽鋒.  醫(yī)學(xué)研究雜志. 2019(05)
[3]過表達(dá)miR-488-5p通過靶向TEM8降低宮頸癌C33A細(xì)胞的增殖和遷移能力[J]. 張沛,岳青芬,侯青霞,韓聽鋒.  中國腫瘤生物治療雜志. 2018(12)
[4]腫瘤內(nèi)皮標(biāo)志物8蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義[J]. 任勇,何威,陳昕薇,梁勵(lì)瑋,馮俊明.  華南國防醫(yī)學(xué)雜志. 2017(06)
[5]ANTXR1對(duì)人食管癌ECA109細(xì)胞株遷移和侵襲能力的影響[J]. 任勇,何威,齊曼麗,陳昕薇,梁勵(lì)瑋,馮俊明.  華南國防醫(yī)學(xué)雜志. 2017(05)
[6]RNA干擾沉默ANTXR1基因?qū)κ彻馨〦CA109細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J]. 任勇,何威,齊曼麗,陳昕薇,梁勵(lì)瑋,馮俊明.  華南國防醫(yī)學(xué)雜志. 2016(12)
[7]siRNA沉默TEM8基因?qū)Ψ切〖?xì)胞肺癌A549細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響[J]. 任勇,何威,齊曼麗,陳昕薇,梁勵(lì)瑋,馮俊明.  臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志. 2016(11)
[8]炭疽毒素受體1蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義[J]. 任勇,何威,齊曼麗,陳昕薇,梁勵(lì)瑋,馮俊明.  華南國防醫(yī)學(xué)雜志. 2016(03)

博士論文
[1]VEGF-D，TEM-8，Podoplanin在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其與局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性[D]. 許毓敏.中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3092326