目的:課題組前期研究發(fā)現(xiàn)TEM8在卵巢癌組織中高表達,與卵巢癌患者不良預后有關。本研究構建TEM8過表達和抑制表達卵巢癌細胞系模型,深入探討TEM8對卵巢癌細胞增殖、周期、凋亡、侵襲和遷移的影響及相關的分子機制。進一步探究轉錄因子如何調控TEM8的表達及相關結合位點,為尋找卵巢癌的生物標記物和靶向治療提供理論依據(jù)。研究方法:1、利用Western blot檢測TEM8蛋白在4種卵巢癌細胞系（OVCAR3、SKOV3、A2780、CAOV3）的表達情況。構建TEM8過表達和抑制表達的卵巢癌細胞系,qRT-PCR和Western blot驗證TEM8的m RNA和蛋白水平的變化。利用MTT、流式細胞儀、劃痕、Transwell實驗方法檢測TEM8基因差異表達前后,卵巢癌細胞增殖、周期、凋亡、侵襲和遷移能力的變化。Western blot實驗檢測與上述生物學行為相關分子的變化。構建裸鼠皮下移植瘤,探究TEM8過表達對裸鼠皮下移植瘤增殖的影響,并利用免疫組化的方法檢測TEM8和細胞核增殖相關核抗原Ki-67的表達。2、從UCSC Xena數(shù)據(jù)庫下載TCGA卵巢癌標準化RNAseq數(shù)據(jù),并通過G... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

TEM8蛋白在卵巢癌細胞系的表達情況

TEM8過表達和抑制表達卵巢癌細胞模型的構建

中國醫(yī)科大學博士學位論文11A：Westernblot檢測TEM8蛋白的變化，B：TEM8的灰度值定量分析柱狀圖，C：qRT-PCR檢測TEM8mRNA的變化3.2TEM8對卵巢癌細胞增殖、周期和凋亡能力的影響通過MTT法檢測TEM8基因差異表達后，卵巢癌細胞增殖能力的變化。結果表明：與空白對照和陰性對照組相比，過表達組增殖能力明顯增加，抑制表達組增殖能力明顯降低，提示TEM8促進卵巢癌細胞增殖（圖1.3）。流式細胞儀檢測TEM8基因差異表達后，卵巢癌細胞周期和凋亡水平的變化。流式細胞周期結果表明：與空白對照和陰性對照組相比，過表達組G0/G1期比例明顯減少，抑制表達組G0/G1期比例明顯增加，說明TEM8促進卵巢癌細胞G0/G1期轉化（圖1.4）。流式細胞凋亡實驗結果表明：與空白對照和陰性對照組相比，TEM8過表達組凋亡水平明顯減少，抑制表達組凋亡水平明顯增加。結果表明TEM8抑制卵巢癌細胞凋亡（圖1.5）。Westernblot檢測過表達和抑制表達組與增殖、周期和凋亡相關指標的變化，結果表明：與空白對照和陰性對照組相比，過表達組Ki-67、cyclinD1、Bcl2/Bax表達明顯增高，上述分子在抑制表達組均降低（圖1.6）。提示TEM8通過上調Ki-67、cyclinD1、Bcl2/Bax的表達，促進卵巢癌細胞殖、G0/G1期轉化，抑制細胞凋亡。圖1.3TEM8基因差異表達后卵巢癌細胞增殖能力的變化

【參考文獻】：
期刊論文
[1]不同分級NSCLC病灶內FoxM1表達的變化及其與增殖、侵襲基因表達的相關性[J]. 張靜,熊琦,陶海濤,秦博宇,張國慶.  疑難病雜志. 2019(05)
[2]微小RNA-664a-3p在乳腺癌組織的表達及對乳腺癌細胞生物學行為的影響[J]. 張沛,岳青芬,侯青霞,韓聽鋒.  醫(yī)學研究雜志. 2019(05)
[3]過表達miR-488-5p通過靶向TEM8降低宮頸癌C33A細胞的增殖和遷移能力[J]. 張沛,岳青芬,侯青霞,韓聽鋒.  中國腫瘤生物治療雜志. 2018(12)
[4]腫瘤內皮標志物8蛋白在非小細胞肺癌中的表達及其臨床意義[J]. 任勇,何威,陳昕薇,梁勵瑋,馮俊明.  華南國防醫(yī)學雜志. 2017(06)
[5]ANTXR1對人食管癌ECA109細胞株遷移和侵襲能力的影響[J]. 任勇,何威,齊曼麗,陳昕薇,梁勵瑋,馮俊明.  華南國防醫(yī)學雜志. 2017(05)
[6]RNA干擾沉默ANTXR1基因對食管癌ECA109細胞增殖和凋亡的影響[J]. 任勇,何威,齊曼麗,陳昕薇,梁勵瑋,馮俊明.  華南國防醫(yī)學雜志. 2016(12)
[7]siRNA沉默TEM8基因對非小細胞肺癌A549細胞增殖和侵襲能力的影響[J]. 任勇,何威,齊曼麗,陳昕薇,梁勵瑋,馮俊明.  臨床與實驗病理學雜志. 2016(11)
[8]炭疽毒素受體1蛋白在食管鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義[J]. 任勇,何威,齊曼麗,陳昕薇,梁勵瑋,馮俊明.  華南國防醫(yī)學雜志. 2016(03)

博士論文
[1]VEGF-D，TEM-8，Podoplanin在結直腸癌中的表達及其與局部淋巴結轉移的相關性[D]. 許毓敏.中國協(xié)和醫(yī)科大學 2008



本文編號：3092326