子宮頸癌是女性最常見惡性腫瘤之一,高危型人乳頭瘤病毒（HPV）感染是其發(fā)生發(fā)展的必要條件。HPV16是主要的致癌病毒亞型,其早期調(diào)控蛋白E6/E7在宮頸上皮惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中具有重要作用。本研究通過(guò)構(gòu)建小干擾RNA（small interfering RNA,siRNA）介導(dǎo)的HPV16E6/E7基因穩(wěn)定沉默細(xì)胞株,探討了E6/E7癌基因?qū)ψ訉m頸鱗癌SiHa細(xì)胞增殖、凋亡及相關(guān)周期因子的影響;通過(guò)構(gòu)建cyclinD1基因真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染SiHa細(xì)胞,初步研究了cyclin D1過(guò)表達(dá)對(duì)子宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞增殖及相關(guān)周期因子的影響。首先設(shè)計(jì)siRNA序列,構(gòu)建E6/E7shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SiHa細(xì)胞,G418篩選、鑒定,獲得E6/E7基因穩(wěn)定沉默細(xì)胞株cm-16,設(shè)立空質(zhì)粒細(xì)胞株B3為空白對(duì)照。利用QT-PCR和RT-PCR分別檢測(cè)SiHa/B3/cm-16細(xì)胞E6/E7基因mRNA的表達(dá)水平、Western blot檢測(cè)SiHa/B3/cm-16細(xì)胞E6/E7蛋白的表達(dá)。檢測(cè)得到cm-16細(xì)胞E6/E7基因沉默效率分別為89%、82%,確定shRNA序列可隨質(zhì)粒載體整合至SiHa細(xì)胞基... 

【文章來(lái)源】：河北北方學(xué)院河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
英文縮寫
前言
實(shí)驗(yàn)一 shRNA介導(dǎo)的HPV16 E6/E7基因穩(wěn)定沉默對(duì)宮頸鱗癌SiHa增殖及凋亡的影響
    材料與方法
    結(jié)果
實(shí)驗(yàn)二 E6/E7基因穩(wěn)定沉默后對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞相關(guān)周期因子的影響
    材料與方法
    結(jié)果
實(shí)驗(yàn)三 cyclinD1在宮頸上皮內(nèi)瘤變及鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)特征及HPVE7相關(guān)性研究
    材料和方法
    結(jié)果
實(shí)驗(yàn)四 cyclinD1質(zhì)粒構(gòu)建及過(guò)表達(dá)后對(duì)子宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖的影響
    材料和方法
    結(jié)果
實(shí)驗(yàn)五 cyclinD1過(guò)表達(dá)對(duì)子宮頸鱗癌SiHa周期相關(guān)因子的影響
    材料與方法
    結(jié)果
附圖
附表
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 基因沉默技術(shù)的研究進(jìn)展及應(yīng)用現(xiàn)狀
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3058304