目的:研究鞘氨醇激酶2（SphK2）對(duì)人卵巢癌細(xì)胞系SKOV3和HO8910細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響,探討其可能調(diào)控機(jī)制。方法:設(shè)計(jì)并體外合成靶向SphK2的shRNA（short hairpin RNA）序列（shRNA SphK2）及陰性對(duì)照序列（shRNA NC）,并與LV3（H1/GFP&Puro）慢病毒載體重組形成shRNA表達(dá)載體,包裝shRNA慢病毒顆粒后分別轉(zhuǎn)染SKOV3和HO8910細(xì)胞系。分別用Real-time PCR和Western blot法檢測shRNA SphK2病毒顆粒轉(zhuǎn)染后在mRNA及蛋白水平的沉默效率。Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移和侵襲能力變化;Western blot法檢測SphK2敲降后細(xì)胞中MMP-9蛋白表達(dá)。結(jié)果:用構(gòu)建的shRNA慢病毒顆粒感染SKOV3和HO8910細(xì)胞后,SphK2 mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著下降。SKOV3和HO8910細(xì)胞中,shRNA SphK2轉(zhuǎn)染組的遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)均顯著少于shRNA NC組和未轉(zhuǎn)染組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Western blot結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染后48h,... 

【文章來源】：現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展. 2020,29(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

載體圖譜

Real-time PCR結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染shRNA SphK2后,SKOV3和HO8910細(xì)胞中SphK2 mRNA表達(dá)水平明顯低于轉(zhuǎn)染shRNA陰性組與未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞(P<0.05),而后兩組無顯著差異(P>0.05)(圖2)。SphK2 shRNA轉(zhuǎn)染后,SKOV3和HO8910細(xì)胞中SphK2 mRNA的表達(dá)抑制率分別為0.71±0.060(P<0.05)和0.75±0.070(P<0.05)。Western blot結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染shRNA SphK2后,SKOV3和HO8910細(xì)胞中SphK2蛋白表達(dá)水平明顯低于轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照和未轉(zhuǎn)梁組(P<0.05),而后兩組無顯著差異(P>0.05)。見圖2、3。圖3 Western blot檢測SphK2 shRNA的干擾效率

Western blot檢測SphK2 shRNA的干擾效率


本文編號(hào)：3054845