第一部分mi R-365在自然流產(chǎn)蛻膜中的表達(dá)分析及其對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡的影響目的:探究mi R-365在自然流產(chǎn)中的表達(dá)情況及其對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡的影響。方法:應(yīng)用mi RNA芯片技術(shù),篩選自然流產(chǎn)蛻膜中差異表達(dá)的mi RNA,使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR）對(duì)芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證;利用p53-和MDM2-promoter熒光報(bào)告系統(tǒng),篩選影響p53和MDM2活性的mi RNAs;構(gòu)建mi R-365過(guò)表達(dá)慢病毒載體,轉(zhuǎn)染HTR-8/SVneo細(xì)胞后,運(yùn)用q RT-PCR和蛋白免疫印跡（Western Blot,WB）技術(shù)分別檢測(cè)p53和MDM2m RAN和蛋白表達(dá)水平,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞凋亡情況,透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果:從自然流產(chǎn)蛻膜中篩選出7個(gè)上調(diào)mi RNAs和10個(gè)下調(diào)mi RNAs,其中mi R-365既可以使MDM2活性明顯降低（P<0.01）,又能使p53活性明顯升高（P<0.01）;MDM2 m RNA和蛋白水平在過(guò)表達(dá)mi R-365的HTR-8/SVneo細(xì)胞中均顯著下... 

【文章來(lái)源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

miRNA差異表達(dá)譜及8種miRNAs在流產(chǎn)蛻膜中的表達(dá)驗(yàn)證（與IA相比**，P<0.01）

27圖 1.2 8 種 miRNAs 對(duì) MDM2、p53 的影響（與 IA 比較，**，P <0.01；*，P <0.05）養(yǎng)層細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系，我們用mi-365過(guò)表達(dá)慢病毒載體轉(zhuǎn)染滋養(yǎng)層細(xì)胞系HTR-8/SVneo，構(gòu)造miR-365過(guò)表達(dá)細(xì)胞模型。采用qRT-PCR檢測(cè)miR-365過(guò)表達(dá)效果，結(jié)果顯示，miR-365表達(dá)水平隨轉(zhuǎn)染時(shí)間的推移而增加，由此表明轉(zhuǎn)染有效（圖1.3）。qRT-PCR和WB的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在過(guò)表達(dá)miR-365的滋養(yǎng)層細(xì)胞中MDM

南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文的mRNA和蛋白水平顯著下調(diào)，p53的mRNA和蛋白水平顯著上調(diào)，且均具有時(shí)間依賴性（圖1.4 A和B）；流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)的miR-365以時(shí)間依賴性的方式誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，且在轉(zhuǎn)染36h后細(xì)胞周期明顯停止在G1期（圖1.4 C）；透射電子顯微鏡觀察不同時(shí)間點(diǎn)滋養(yǎng)層細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化發(fā)現(xiàn)，miR-365過(guò)表達(dá)慢病毒載轉(zhuǎn)染HTR8/SVneo細(xì)胞后，12 h可觀察到明顯的凋亡，24 h和36 h細(xì)胞核染色質(zhì)出現(xiàn)凝縮，凋亡小體明顯（圖1.4 D）。因此，miR-365具有促進(jìn)滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡的功能。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]SGK1 inhibits cellular apoptosis and promotes proliferation via the MEK/ERK/p53 pathway in colitis[J]. Jian-An Bai,Gui-Fang Xu,Li-Jun Yan,Wei-Wen Zeng,Qian-Qian Ji,Jin-Dao Wu,Qi-Yun Tang.  World Journal of Gastroenterology. 2015(20)
[2]早期自然流產(chǎn)絨毛組織miR-10b表達(dá)及意義[J]. 李怡,吳濤,欒麗霞,張蓓蕾,李三陽(yáng),尹國(guó)武.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2013(04)

博士論文
[1]microRNA在流產(chǎn)及早孕蛻膜組織中的表達(dá)及miR-199的功能鑒定[D]. 王煜.內(nèi)蒙古大學(xué) 2015

碩士論文
[1]miRNA-144在復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)絨毛組織中的表達(dá)及其功能研究[D]. 陳冰.中南大學(xué) 2014



本文編號(hào)：2977274