發(fā)布時(shí)間：2021-01-14 15:54

　　目的1、了解宮頸脫落細(xì)胞人乳頭瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）感染狀況,探究高危型人乳頭瘤病毒（high risk-HPV,HR-HPV）感染與宮頸細(xì)胞病理學(xué)特征之間的關(guān)系。2、利用人乳頭瘤病毒58突變型E6E7（Mutant type E6E7,m E6E7）融合基因?yàn)榘悬c(diǎn),以對(duì)人無(wú)致病性的巨細(xì)胞病毒株（Towne株）細(xì)菌人工染色體（SW102Towne bacterial artificial chromosome,SW102-T-BAC）為載體,構(gòu)建攜帶HPV58m E6E7融合基因的重組病毒,鑒定HPV58m E6E7轉(zhuǎn)化活性,為HPV58型治療性疫苗研究奠定基礎(chǔ)。方法1、收集體檢普查女性宮頸脫落細(xì)胞,以所提DNA為模板,用HPV L1區(qū)通用引物MY09/11,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,檢測(cè)宮頸脫落細(xì)胞總感染率;利用HPV E6型特異性引物檢測(cè)宮頸脫落細(xì)胞中具體感染型別;統(tǒng)計(jì)分析HPV感染與臨床病理特征的關(guān)系。2、PCR擴(kuò)增帶有50bp Towne開(kāi)放讀碼框（open reading frame,ORF）75左右同源臂的Galk、HPV58 E6E7融合基因,采... 

【文章來(lái)源】：華北理工大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

用β-actin引物檢測(cè)標(biāo)本質(zhì)量的結(jié)果

第1章宮頸脫落細(xì)胞HPV58型感染狀況分析-15-1)利用熒光定量PCR法，對(duì)總感染率為陽(yáng)性的標(biāo)本DNA進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，檢測(cè)到HPV16型42例；HPV18型15例；HPV31型9例；HPV33型15例；HPV35型6例；HPV39型20例；HPV45型3例；HPV51型21例；HPV52型80例；HPV56型18例；HPV58型78例；HPV59型19例；HPV68型16例；HPV66型28例；HPV82型10例。感染率排在前三位的為HPV52型占13.96%，HPV58型占13.61%，HPV16型占7.33%。2）驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)設(shè)置陰性對(duì)照組為未感染HPV的293細(xì)胞DNA。另外，檢測(cè)過(guò)程還設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照組，分別為含有HPV16的Caski細(xì)胞、含有HPV18的Hele細(xì)胞、含有HPV58的質(zhì)粒DNA，用以檢測(cè)HPV16、HPV18、HPV58的感染率。引物分別為表1中列出的HPV16/18/58的E6區(qū)引物。PCR擴(kuò)增檢測(cè)標(biāo)本DNA，用1%瓊脂糖凝膠電泳對(duì)擴(kuò)增反應(yīng)的產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，凝膠成像儀用于產(chǎn)物條帶的觀察。檢測(cè)到42例HPV16型陽(yáng)性（圖3）,15例HPV18型陽(yáng)性（圖4）,78例HPV58型陽(yáng)性（圖5）。經(jīng)檢測(cè)，42例標(biāo)本可以擴(kuò)增出目的條帶，說(shuō)明有42例標(biāo)本為HPV16陽(yáng)性，陽(yáng)性率為7.33%（42/573）。圖3PCR擴(kuò)增檢測(cè)HPV16感染狀況M：DL2000DNALadder，Neg：陰性對(duì)照，Caski：陽(yáng)性對(duì)照，1-7：標(biāo)本PCR擴(kuò)增檢測(cè)HPV16感染狀況。圖4PCR擴(kuò)增檢測(cè)HPV18感染狀況M：DL2000DNALadder,Neg代表陰性對(duì)照，Hela代表陽(yáng)性對(duì)照，1-7分別為標(biāo)本HPV18感染狀況的檢測(cè)。

第1章宮頸脫落細(xì)胞HPV58型感染狀況分析-15-1)利用熒光定量PCR法，對(duì)總感染率為陽(yáng)性的標(biāo)本DNA進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，檢測(cè)到HPV16型42例；HPV18型15例；HPV31型9例；HPV33型15例；HPV35型6例；HPV39型20例；HPV45型3例；HPV51型21例；HPV52型80例；HPV56型18例；HPV58型78例；HPV59型19例；HPV68型16例；HPV66型28例；HPV82型10例。感染率排在前三位的為HPV52型占13.96%，HPV58型占13.61%，HPV16型占7.33%。2）驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)設(shè)置陰性對(duì)照組為未感染HPV的293細(xì)胞DNA。另外，檢測(cè)過(guò)程還設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照組，分別為含有HPV16的Caski細(xì)胞、含有HPV18的Hele細(xì)胞、含有HPV58的質(zhì)粒DNA，用以檢測(cè)HPV16、HPV18、HPV58的感染率。引物分別為表1中列出的HPV16/18/58的E6區(qū)引物。PCR擴(kuò)增檢測(cè)標(biāo)本DNA，用1%瓊脂糖凝膠電泳對(duì)擴(kuò)增反應(yīng)的產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，凝膠成像儀用于產(chǎn)物條帶的觀察。檢測(cè)到42例HPV16型陽(yáng)性（圖3）,15例HPV18型陽(yáng)性（圖4）,78例HPV58型陽(yáng)性（圖5）。經(jīng)檢測(cè)，42例標(biāo)本可以擴(kuò)增出目的條帶，說(shuō)明有42例標(biāo)本為HPV16陽(yáng)性，陽(yáng)性率為7.33%（42/573）。圖3PCR擴(kuò)增檢測(cè)HPV16感染狀況M：DL2000DNALadder，Neg：陰性對(duì)照，Caski：陽(yáng)性對(duì)照，1-7：標(biāo)本PCR擴(kuò)增檢測(cè)HPV16感染狀況。圖4PCR擴(kuò)增檢測(cè)HPV18感染狀況M：DL2000DNALadder,Neg代表陰性對(duì)照，Hela代表陽(yáng)性對(duì)照，1-7分別為標(biāo)本HPV18感染狀況的檢測(cè)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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