發(fā)布時(shí)間：2021-01-11 23:16

　　背景宮頸癌（Cervical cancer,CC）是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一,也是全球女性癌癥死亡的第四大原因。經(jīng)典Wnt/β-catenin信號(hào)通路的異常激活增強(qiáng)了CC細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力,是CC發(fā)生發(fā)展的重要原因之一。但是作為Wnt配體的輔助受體,LRP5在CC發(fā)病中的確切作用尚未得到充分證實(shí),需要進(jìn)一步探究。目的探討激活或敲除LRP5基因后對(duì)CC細(xì)胞的影響,進(jìn)而揭示LRP5基因在CC發(fā)病中的作用和分子機(jī)制。方法1.免疫組化:采用免疫組織化學(xué)染色方法對(duì)宮頸癌石蠟組織芯片進(jìn)行染色,檢測(cè)LRP5蛋白在正常組織及CC組織中的表達(dá)水平。2.構(gòu)建LRP5基因敲除或激活的CC穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株a)質(zhì)粒準(zhǔn)備:購(gòu)買可敲除LRP5基因的LRP5 CRISPR/Cas9 KO質(zhì)粒,激活LRP5基因的LRP5 CRISPR Act質(zhì)粒以及兩者的對(duì)照質(zhì)粒。b)篩選細(xì)胞:將HeLa細(xì)胞接種到6孔板中,用LRP5 CRISPR/Cas9 KO質(zhì)粒（NC-KO作為對(duì)照質(zhì)粒）或LRP5 CRISPR Act質(zhì)粒（NC-Act作為對(duì)照質(zhì)粒）轉(zhuǎn)染細(xì)胞,之后用嘌呤霉素連續(xù)篩選。提取細(xì)胞RNA,通過(guò)qRT-PCR分析LRP5... 

【文章來(lái)源】：河南大學(xué)河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

LRP5在CC組織中表達(dá)上調(diào)注：圖A為組織芯片的IHC染色（a,b,c放大100倍；d,e,f放大200倍）；圖B為CC患者（n=291）

形成的克隆大小以及數(shù)量均小于對(duì)照組，表明敲除 LRP5 基因抑制了 HeLa 細(xì)胞體外克隆形成能力（P<0.05，圖3-4 D）。細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)，在劃痕后 0 h，36 h，72 h 拍攝圖片，結(jié)果顯示敲除 LRP5基因細(xì)胞劃痕愈合較對(duì)照組減慢，提示敲除 LRP5 基因抑制 HeLa 細(xì)胞的遷移能力（P<0.05，圖 3-4 E-F）。流式細(xì)胞術(shù)分析了敲除 LRP5 基因?qū)?HeLa 細(xì)胞的細(xì)胞周期分布影響，與對(duì)照組相比，敲除 LRP5 基因 HeLa 細(xì)胞 S 期細(xì)胞數(shù)目減少

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Characterization of genetically engineered mouse models carrying Col2a1-cre-induced deletions of Lrp5 and/or Lrp6[J]. Cassie A Schumacher,Danese M Joiner,Kennen D Less,Melissa Oosterhouse Drewry,Bart O Williams.  Bone Research. 2015(04)
[2]LRP5 polymorphism—A potential predictor of the clinical outcome in advanced gastric cancer patients treated with EOF regimen[J]. Xin Liu,Ming-Zhu Huang,Zhi-Yu Chen,Xiao-Yin Zhao,Chen-Chen Wang,Wei Peng,Ji-Liang Yin,Jin Li,Xiao-Dong Zhu.  Chinese Journal of Cancer Research. 2014(04)



本文編號(hào)：2971663