實驗?zāi)康?檢測宮頸癌組織DNA中HPV整合情況、HPV和HMGA2拷貝數(shù)的變化,以及HMGA2蛋白表達(dá)分別在未病變宮頸、CIN和宮頸癌三種不同的組織中的水平,預(yù)測出HMGA2基因與宮頸惡變之間可能的關(guān)系,并探索HMGA2在宮頸癌變過程中可能起到的作用機(jī)制。實驗方法:1.收集新鮮的宮頸癌的樣本,提取DNA樣本,并通過DIPS-PCR的方法檢測出宮頸癌樣本中的HPV整合情況以及整合位點。2.FISH探針技術(shù)檢查HMGA2和HPV在不同宮頸病變階段的宮頸組織中的拷貝數(shù)及HPV整合在HMGA2基因位置的差異;免疫組織化學(xué)方法（IHC）檢測HMGA2蛋白在無病變宮頸、CIN和宮頸癌三種組織樣本中的表達(dá)量;3.利用RT-PCR、Western技術(shù)、細(xì)胞流式檢測凋亡、克隆形成等實驗方法,檢測過表達(dá)/沉默HMGA2基因后對于HPV16陽性的S12、Si Ha和Ca Ski三種細(xì)胞系生長的影響,Bcl-2基因和Caspase3基因在RNA水平和蛋白水平表達(dá)的改變,探索HMGA2與宮頸癌變可能的關(guān)系及可能的機(jī)制通路。實驗結(jié)果:1.在24個新鮮宮頸癌組織DNA樣本中共檢測到25個HR-HPV整合位點;HMG... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

HMGA2蛋白的IHC染色以及HPV和HMGA2運用FISH技術(shù)檢測的熒光信號

在任何連續(xù)的宮頸病變之間 HPV 拷貝數(shù)沒有顯著差異（圖 2D；CINI vs CINII，P = 0.938；CINII vs CINIII，P = 0.136；CINIII vs I 期宮頸癌；P = 0.043；I 期宮頸癌 vsII 期宮頸癌，P = 0.052）。HMGA2 拷貝數(shù)在正常宮頸活組織檢查樣本與 CIN、正常宮頸組織與宮頸癌樣本之間均無顯著差異（分別為 P = 0.499 和 P = 0.457）（圖 2B）。此外，在任何連續(xù)的 CIN 和宮頸癌各病理階段之間 HMGA2 拷貝數(shù)沒有顯著差異（圖2E；CINI 對 CINII，P = 0.121；CINII 對 CINIII，P = 0.163；CINIII 對 I 期宮頸癌；P =0.948; I 期宮頸癌對 II 期宮頸癌，P = 0.288）。HMGA2 的蛋白表達(dá)運用累計光密度值（IOD）評價。宮頸癌樣本中 HMGA2 的平均 IOD 值高于 CIN 樣本（圖 2C 和表 3，132507.00 比 16485.41，P <0.01）。在 I 期宮頸癌中，HMGA2 的 IOD 值也高于 CINIII 樣本（圖 2F 和表 3,136380.20 對 9813.53，P <0.01）。 在 CIN 和宮頸癌的連續(xù)階段之間未觀察到其他顯著差異（圖 2F；正常對CINI，P = 0.589；CINI 對 CINII，P = 0.286；CINII 對 CINIII，P = 0.962；宮頸癌 I 期對宮頸癌 II 期，P = 0.791）。

華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文達(dá)（C）的統(tǒng)計分析。HPV 拷貝數(shù)（D），HMGA2 拷貝數(shù)（E）和 HMGA2 蛋白表達(dá)（F）在不同階段宮頸病變中的表達(dá)。我們通過 FISH 技術(shù)也在同 個樣本中同時檢測到了 HPV（紅色）和 HMGA2（綠色）的拷貝數(shù)。DIPS-PCR 顯示 HPV 整合入 HMGA2 基因的兩個樣品中的每 個中都檢測到了融合信號，而其他樣本中沒有融合信號（圖 3）。


本文編號：2961702