發(fā)布時(shí)間：2021-01-03 22:58

　　背景與目的:絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶31（serine/threonine kinases 31,STK31）基因在人類多種癌癥中扮演重要角色,且STK31基因的表達(dá)受其啟動(dòng)子及第一外顯子區(qū)甲基化狀態(tài)的影響;病毒感染與腫瘤組織中某些抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)高甲基化有關(guān)。本研究旨在探討宮頸癌細(xì)胞系中HPV16 E6、E7及E6/E7癌基因?qū)TK31基因甲基化狀態(tài)及表達(dá)的影響,以及不同種類甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyltransferases,DNMTs）基因在STK31基因甲基化中的潛在作用。方法:構(gòu)建外源性HPV16 E6、E7以及E6/E7基因共表達(dá)慢病毒,分別感染人乳頭瘤病毒（human papillomavirus,HPV）陰性宮頸癌細(xì)胞系HT-3及C33A,獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系;采用亞硫酸氫鹽基因組測(cè)序法（bisulfite genomic sequencing,BGS）和甲基化特異性PCR（methylation-specific PCR,MSP）檢測(cè)3種HPV陽(yáng)性宮頸癌細(xì)胞系HeLa、SiHa和CasKi以及HPV陰性宮頸癌細(xì)胞系HT-3和C33A轉(zhuǎn)染前后STK31基因的甲基化狀... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)癌癥雜志. 2015年09期 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：11 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染和培養(yǎng)
    1.2 細(xì)胞DNA提取及DNA亞硫酸鹽修飾
    1.3 BGS及MSP檢測(cè)
    1.4 RNA提取及熒光定量PCR檢測(cè)
    1.5 Western blot檢測(cè)
    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 外源性HPV16 E6、E7及E6/E7蛋白在HPV陰性宮頸癌細(xì)胞系HT-3及C33A中穩(wěn)定表達(dá)
    2.2 宮頸癌細(xì)胞系轉(zhuǎn)染前后及HPV陰、陽(yáng)性宮頸癌組織中STK31基因的甲基化狀態(tài)的差異
    2.3 宮頸癌細(xì)胞系中HPV感染通過(guò)調(diào)節(jié)STK31基因啟動(dòng)子及第1外顯子甲基化狀態(tài)影響其基因的表達(dá)
    2.4 DNMT、DNMT2、DNMT3a、DNMT3b和DNMT3L基因m RNA在外源性HPV16 E6/E7轉(zhuǎn)染前后宮頸癌細(xì)胞系及HPV陰陽(yáng)性宮頸癌標(biāo)本中表達(dá)水平的比較
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