目的研究維甲酸/干擾素誘導(dǎo)細(xì)胞死亡相關(guān)基因19（Gene associated with retinoid interferon induced mortality 19,GRIM19）對多囊卵巢綜合征（Polycystic ovary syndrome,PCOS）患者顆粒細(xì)胞的血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）的調(diào)節(jié)作用,并探討其潛在的分子調(diào)控機(jī)制。方法選取PCOS患者及正常人的卵巢原代顆粒細(xì)胞（Primary granulosa cells,PGC）作為研究對象,研究GRIM19對PCOS患者PGC的VEGF的調(diào)控作用。同時(shí),利用siRNA沉默技術(shù)以及質(zhì)粒過表達(dá)技術(shù)來下調(diào)或上調(diào)PCOS患者PGC細(xì)胞中GRIM19基因的表達(dá),并檢測處理前后VEGF的mRNA及蛋白相對表達(dá)量的差異。同樣,分別用不同濃度梯度的睪酮（Testosterone）孵育正常人的PGC,模擬PCOS患者體內(nèi)的高雄激素環(huán)境。并檢測PGC細(xì)胞中的GRIM19、VEGF及STAT3的mRNA和蛋白的相對表達(dá)量,以探究PCOS中GRIM19對VEGF可能的調(diào)... 

【文章來源】：海南醫(yī)學(xué)院海南省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

人卵巢原代顆粒細(xì)胞的顯微鑒定（40×）

海南醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文在前面的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn) PCOS 患者與正常人比，其 PGC 中的 VEGF 表達(dá)量較高而 GRIM19 的表達(dá)水平較低，為了探究二者是否具有關(guān)聯(lián)，我們采用針對GRIM19 的特異性 siRNA 來沉默 PCOS 患者 PGC 的 GRIM19 基因，并通過 qPCR和 WB 檢測 GRIM19 沉默后 VEGF 表達(dá)水平的變化。結(jié)果如圖 3 所示：經(jīng) qPCR 檢測發(fā)現(xiàn) 3 條干擾 RNA 均能沉默 GRIM19，其中 siRNA1-GRIM19 的沉默效果最好，其 GRIM19 的 mRNA 相對表達(dá)量與陰性對照組比，減少 5.14 倍（P < 0.001）。與此同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)下調(diào) GRIM19 的表達(dá)后，siRNA1-GRIM19 組 VEGF 的 mRNA 相對表達(dá)量較陰性對照組增加 3.93 倍（P < 0.001）。上述結(jié)果表明在 PCOS 患者的 PGC 中 GRIM19 與 VEGF 的表達(dá)密切相關(guān)，GRIM19 可在 mRNA 水平對 VEGF 的表達(dá)起負(fù)調(diào)節(jié)作用。

18圖 4. GRIM19 基因沉默后 GRIM19 及 VEGF 的蛋白相對表達(dá)量。（A）GRIM19 基因被小干擾 RNA 沉默后的 GRIM19 及 VEGF 的 WB 圖；（B）siRNA1 沉默 GRIM19 基因后 GRIM19及 VEGF 蛋白的相對表達(dá)量；（C）siRNA2 沉默 GRIM19 基因后 GRIM19 及 VEGF 蛋白的相對表達(dá)量；（D）siRNA3 沉默 GRIM19 基因后 GRIM19 及 VEGF 蛋白的相對表達(dá)量。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]多囊卵巢綜合征患者血清血管內(nèi)皮生長因子、內(nèi)皮抑素水平及對卵巢間質(zhì)血流的影響研究[J]. 劉梅梅,丁慧,尹曉靜,王珊,于彩虹,李肖肖.  中國全科醫(yī)學(xué). 2017(04)



本文編號：2954660