目的:探索輻射介導(dǎo)下HeLa細(xì)胞內(nèi)IER5的生物學(xué)功能及IER5與Cdc25B表達(dá)的關(guān)系。方法:采用4 Gy γ射線分別照射HeLa細(xì)胞和siIER5-HeLa細(xì)胞,收集照射后0、0.5、2、4、8、12、16、24、36、48h的細(xì)胞樣本,并設(shè)未照射細(xì)胞為對照組。采用Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)IER5和Cdc25B蛋白的表達(dá);流式細(xì)胞術(shù)檢測照射后G2期周期阻滯情況。另外對HeLa細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染siNC和siIER5,對siIER5-HeLa細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染IER5過表達(dá)質(zhì)粒與空載體質(zhì)粒,然后采用2Gy和4Gy γ射線照射各組細(xì)胞,收集照射后0.5、2、4、8、12、24h和對照組細(xì)胞樣,通過流式細(xì)胞術(shù),qPCR和Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)G2/M期阻滯及IER5與Cdc25B mRNA和蛋白水平變化。通過生物信息學(xué)分析及查閱相關(guān)文獻(xiàn)篩選出可能參與IER5調(diào)控Cdc25B基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控因子,通過干擾HeLa細(xì)胞內(nèi)IER5的表達(dá)后,檢測各轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白水平變化,來初步探索在輻射介導(dǎo)下IER5影響Cdc25B轉(zhuǎn)錄可能的機(jī)制。結(jié)果:1.在4Gy劑量輻射介導(dǎo)下HeLa細(xì)胞組與siIER... 

【文章來源】：中國疾病預(yù)防控制中心北京市

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
一、引言
二、材料與方法
    1. 材料
        1.1 細(xì)胞
        1.2 siRNA與質(zhì)粒
        1.3 試劑
        1.4 抗體
        1.5 儀器
        1.6 溶液配制
    2. 方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.1.1 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.1.2 細(xì)胞傳代
            2.1.3 細(xì)胞凍存
            2.1.4 細(xì)菌培養(yǎng)
            2.1.5 質(zhì)粒提取
            2.1.6 菌種保種
60Coγ射線照射">            2.1.7 ⁶⁰Coγ射線照射
            2.1.8 細(xì)胞收集
        2.2 流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry,FCM）檢測細(xì)胞周期
            2.2.1 固定細(xì)胞
            2.2.2 清洗細(xì)胞
            2.2.3 PI染色
        2.3 實時熒光定量PCR實驗（realtime PCR）
            2.3.1 總RNA提取
            2.3.2 總RNA檢測
            2.3.3 RNA變性
            2.3.4 RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA
            2.3.5 qPCR反應(yīng)
        2.4 蛋白免疫印跡（Western blot）檢測
            2.4.1 總蛋白提取
            2.4.2 濃度測定與定量
            2.4.3 蛋白變性
            2.4.4 Western blot實驗步驟
        2.5 數(shù)據(jù)分析
            2.5.1 流式周期檢測結(jié)果數(shù)據(jù)處理
            2.5.2 qPCR數(shù)據(jù)處理
            2.5.3 Western blot數(shù)據(jù)處理
三、結(jié)果
    1. 輻射介導(dǎo)下HeLa內(nèi)G2/M期阻滯及IER5與Cdc25B表達(dá)情況研究
    2. 輻射介導(dǎo)下HeLa細(xì)胞轉(zhuǎn)染siIER5后Cdc25B蛋白表達(dá)研究
    3. 輻射介導(dǎo)下siIER5-HeLa細(xì)胞轉(zhuǎn)染IER5過表達(dá)質(zhì)粒后Cdc25B蛋白表達(dá)研究
    4. 參與IER5調(diào)控Cdc25B轉(zhuǎn)錄相關(guān)的調(diào)控蛋白的初步篩選與驗證
四、討論
五、結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
個人簡介
附錄1
附錄2


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]輻射介導(dǎo)下HeLa細(xì)胞中Cdc25B與IER5蛋白表達(dá)的關(guān)系[J]. 趙現(xiàn)哲,劉曉丹,周平坤,姜曉燕,丁庫克.  癌變·畸變·突變. 2017(06)
[2]細(xì)胞分裂周期蛋白CDC25B抑制劑研究進(jìn)展[J]. 沈佳匯,陳立,楊天訓(xùn),苗冉冉,李亞楠.  中國新藥雜志. 2014(24)
[3]細(xì)胞分裂周期蛋白2啟動子報告基因載體的構(gòu)建與鑒定[J]. 周輝,吳煒,趙明.  天津醫(yī)藥. 2014(02)
[4]利用RNA干擾技術(shù)構(gòu)建IER5-SiRNA-Hela細(xì)胞系[J]. 李莉,趙煥英,楊川杰,魯葦媛,郝淳,喬茶,周平坤,徐勤芝,丁庫克.  中國實驗診斷學(xué). 2011(01)
[5]IER5基因?qū)eLa細(xì)胞輻射敏感性的影響[J]. 李秀楠,李莉,楊川杰,郝淳,喬茶,楊芬,周平坤,王佩,袁增強(qiáng),李延玲,魯瑋媛,張為遠(yuǎn),丁庫克.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2009(07)
[6]γ射線照射對IER5基因mRNA表達(dá)的影響[J]. 丁庫克,沈晶晶,許莉莉,李延玲,周萍,馬斌榮,趙增強(qiáng),隋建麗,周平坤.  中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志. 2008 (01)

碩士論文
[1]輻射后HepG2細(xì)胞IER5與Cdc25B啟動子的相互作用[D]. 楊明月.河北醫(yī)科大學(xué) 2014



本文編號：2951022