目的:探討在常氧和低氧條件下IL-6是否經(jīng)JAK2/STAT3通路上調(diào)人上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）細(xì)胞中HIF-1α的轉(zhuǎn)錄活性與表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)腫瘤缺氧耐受和腫瘤形成,為開(kāi)展以IL-6及相關(guān)信號(hào)分子為靶點(diǎn)的EOC診斷及治療提供新思路。方法:1.常規(guī)培養(yǎng)四種人卵巢癌細(xì)胞（A2780,SKOV3,ES-2,OVCAR3）,分別抽提總RNA和蛋白,進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)和Western Blotting測(cè)定,前者檢測(cè)STAT3及HIF-1αm RNA的表達(dá)水平,后者檢測(cè)磷酸化/總STAT3及HIF-1α蛋白表達(dá)水平,采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)上述四種卵巢癌細(xì)胞中IL-6的分泌水平。2.選擇IL-6分泌水平具有顯著差異的人卵巢癌細(xì)胞系A(chǔ)2780及SKOV3,分別應(yīng)用不同濃度的IL-6（1 ng/ml、10 ng/ml、50 ng/ml）處理不同時(shí)間（6 h,12 h,24 h,48 h）后,抽提總RNA,進(jìn)行定量q PCR反應(yīng),檢測(cè)STAT3及HIF-1αm RNA的表達(dá)水平,用以確定外源性IL-6作用的最適濃度和最佳時(shí)間點(diǎn)。3.IL-... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

EOC細(xì)胞中IL-6、STAT3、HIF-1α的mRNA水平

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中 IL-6、STAT3 及 HIF-1α 的蛋白表達(dá) ELISA 法檢測(cè)了常氧條件下四種卵巢癌細(xì)胞如圖 2A 所示）A2780 細(xì)胞幾乎不分泌 IL-6，度的 IL-6 分泌，SKOV3 細(xì)胞的 IL-6 分泌水平應(yīng)用 Western Blotting 技術(shù)檢測(cè) EOC 細(xì)胞中總3）與 HIF-1α 的蛋白表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)在四種 E在 A2780 細(xì)胞中表達(dá)最低，SKOV3 細(xì)胞中表

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文處理 A2780 細(xì)胞 30 min 和 12 h 時(shí)，HIF-1α 的蛋白表達(dá)水平顯著升高，分別為對(duì)照組的 3.01 和 3.66 倍；從圖 4.A 結(jié)果還可以看出，在 HIF-1α 蛋白表達(dá)水平顯著升高時(shí)，p-STAT3 的蛋白表達(dá)水平也相應(yīng)升高，分別為對(duì)照組的 2.58 和 3.18倍。在處理 SKOV3 細(xì)胞時(shí)，如圖 3.C-D 所示，加入不同濃度 IL-6 處理不同時(shí)間后，與對(duì)照組相比，STAT3 和 HIF-1α 的基因表達(dá)水平均有不同程度升高。在 IL-6（10 ng/ml）作用組處理 12 h 時(shí)，HIF-1α 基因表達(dá)水平明顯升高。圖 4.B 結(jié)果表明，IL-6（10 ng/ml）作用組處理 SKOV3 細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)時(shí)，HIF-1α 的蛋白表達(dá)水平持續(xù)升高，且 IL-6 的加強(qiáng)作用持續(xù)至 12 h，p-STAT3 的蛋白表達(dá)水平也相應(yīng)升高，趨勢(shì)與 HIF-1α 的變化一致。綜合圖 3 及圖 4 的結(jié)果，我們分別選擇 IL-6（50 ng/ml）和 IL-6（10 ng/ml）處理 A2780 及 SKOV3 細(xì)胞 12 h 作為最適濃度和處理時(shí)間。


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