目的:探討在常氧和低氧條件下IL-6是否經JAK2/STAT3通路上調人上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）細胞中HIF-1α的轉錄活性與表達,進而促進腫瘤缺氧耐受和腫瘤形成,為開展以IL-6及相關信號分子為靶點的EOC診斷及治療提供新思路。方法:1.常規(guī)培養(yǎng)四種人卵巢癌細胞（A2780,SKOV3,ES-2,OVCAR3）,分別抽提總RNA和蛋白,進行實時定量PCR反應和Western Blotting測定,前者檢測STAT3及HIF-1αm RNA的表達水平,后者檢測磷酸化/總STAT3及HIF-1α蛋白表達水平,采用酶聯免疫吸附實驗（ELISA）檢測上述四種卵巢癌細胞中IL-6的分泌水平。2.選擇IL-6分泌水平具有顯著差異的人卵巢癌細胞系A2780及SKOV3,分別應用不同濃度的IL-6（1 ng/ml、10 ng/ml、50 ng/ml）處理不同時間（6 h,12 h,24 h,48 h）后,抽提總RNA,進行定量q PCR反應,檢測STAT3及HIF-1αm RNA的表達水平,用以確定外源性IL-6作用的最適濃度和最佳時間點。3.IL-... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數】：72 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

EOC細胞中IL-6、STAT3、HIF-1α的mRNA水平

天津醫(yī)科大學碩士學位論文中 IL-6、STAT3 及 HIF-1α 的蛋白表達 ELISA 法檢測了常氧條件下四種卵巢癌細胞如圖 2A 所示）A2780 細胞幾乎不分泌 IL-6，度的 IL-6 分泌，SKOV3 細胞的 IL-6 分泌水平應用 Western Blotting 技術檢測 EOC 細胞中總3）與 HIF-1α 的蛋白表達水平，發(fā)現在四種 E在 A2780 細胞中表達最低，SKOV3 細胞中表

天津醫(yī)科大學碩士學位論文處理 A2780 細胞 30 min 和 12 h 時，HIF-1α 的蛋白表達水平顯著升高，分別為對照組的 3.01 和 3.66 倍；從圖 4.A 結果還可以看出，在 HIF-1α 蛋白表達水平顯著升高時，p-STAT3 的蛋白表達水平也相應升高，分別為對照組的 2.58 和 3.18倍。在處理 SKOV3 細胞時，如圖 3.C-D 所示，加入不同濃度 IL-6 處理不同時間后，與對照組相比，STAT3 和 HIF-1α 的基因表達水平均有不同程度升高。在 IL-6（10 ng/ml）作用組處理 12 h 時，HIF-1α 基因表達水平明顯升高。圖 4.B 結果表明，IL-6（10 ng/ml）作用組處理 SKOV3 細胞不同時間點時，HIF-1α 的蛋白表達水平持續(xù)升高，且 IL-6 的加強作用持續(xù)至 12 h，p-STAT3 的蛋白表達水平也相應升高，趨勢與 HIF-1α 的變化一致。綜合圖 3 及圖 4 的結果，我們分別選擇 IL-6（50 ng/ml）和 IL-6（10 ng/ml）處理 A2780 及 SKOV3 細胞 12 h 作為最適濃度和處理時間。


本文編號：2923746