第一部分:預(yù)測ITGA3是hsa-miR-199a-5p的可能靶基因及ITGA3和VEGF相互作用目的:利用生物信息學(xué)預(yù)測軟件尋找hsa-miR-199a-5p與ITGA3基因是否存在靶向關(guān)系,ITGA3是否為hsa-miR-199a-5p的靶基因;查閱相關(guān)文獻(xiàn),明確hsa-miR-199a-5p和ITGA3之間是否存在靶向調(diào)控關(guān)系,利用蛋白相互作用軟件對ITGA3與VEGF之間相互作用關(guān)系進(jìn)行預(yù)測。方法:1、應(yīng)用miRbase獲取hsa-miR-199a-5p的堿基序列;2、使用Target Scan、miRDB、miRTarBase和microRNA.org等在線軟件尋找hsa-miR-199a-5p與ITGA3基因的靶向關(guān)系;3、查閱國內(nèi)外數(shù)據(jù)庫關(guān)于hsa-miR-199a-5p和ITGA3的相關(guān)文獻(xiàn);4、尋找是否有研究驗證hsa-miR-199a-5p和ITGA3之間存在調(diào)控關(guān)系;5、應(yīng)用STRING蛋白作用軟件預(yù)測ITGA3和VEGF之間的作用關(guān)系。結(jié)果:1、TargetScan、miRDB、miRTarBase和microRNA.org四個在線預(yù)測軟件均找到的ITGA3是hsa-miR-199a-5p一個靶基因,2、國外關(guān)于膀胱癌和頭頸部鱗狀細(xì)胞癌的研究中報道了hsa-miR-199a-5p與ITGA3存在靶向關(guān)系,hsa-miR-199a-5p調(diào)控ITGA3的表達(dá);3、STRING軟件預(yù)測到ITGA3和VEGF之間存在相互作用。結(jié)論:1.hsa-miR-199a-5p和ITGA3之間存在靶向關(guān)系,hsa-miR-199a-5p調(diào)控ITGA3的表達(dá)。2.ITGA3和VEGF之間有相互作用關(guān)系。第二部分:孕早期稽留流產(chǎn)者絨毛組織中hsa-mi R-199a-5p及ITGA3、VEGF表達(dá)變化的研究目的:本研究旨在檢測孕早期稽留流產(chǎn)患者絨毛組織中hsa-mi R-199a-5p及ITGA3、VEGF表達(dá)變化,并分析三者之間關(guān)系,探討其在稽留流產(chǎn)發(fā)生機(jī)制中的意義,為預(yù)防和治療孕早期稽留流產(chǎn)提供理論基礎(chǔ)。方法:1、收集2017年11月-2018年2月在廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院計劃生育科門診就診的行人工流產(chǎn)的患者66例,其中稽留流產(chǎn)并行人工流產(chǎn)患者35例(稽留流產(chǎn)組),正常早孕要求行人工流產(chǎn)的患者31例(正常早孕組);2、采用實時熒光定量PCR法檢測絨毛組織中的hsa-mi R-199a-5p和ITGA3、VEGFm RNA的表達(dá);3、采用蘇木素-伊紅(HE)染色觀察胎盤絨毛組織的形態(tài)結(jié)構(gòu);4、采用免疫組化SP法檢測各組絨毛組織中ITGA3蛋白、VEGF蛋白的表達(dá)情況,采用CD34標(biāo)記絨毛組織內(nèi)皮細(xì)胞,并檢測兩組絨毛組織的微血管密度(MVD)值;5、分析ITGA3、VEGF的表達(dá)與MVD之間的相關(guān)性;6、統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件,計量資料以x±s表示,行t檢驗,變量之間相關(guān)性行spearman相關(guān)分析。P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1.q RT-PCR檢測結(jié)果及相關(guān)性1.1 hsa-mi R-199a-5p在稽留流產(chǎn)組絨毛組織中相對表達(dá)量為1.99±0.29,正常早孕組為1.07±0.16,稽留流產(chǎn)組絨毛組織中hsa-mi R-199a-5p表達(dá)量高于正常早孕組,差異具有顯著性(PO.05);1.2 ITGA3 m RNA在稽留流產(chǎn)組患者絨毛組織中相對表達(dá)量為1.69±0.27,正常早孕組為2.61±0.36,稽留流產(chǎn)組絨毛組織中ITGA3 m RNA表達(dá)量低于正常早孕組,差異具有顯著性(PO.05);1.3 VEGF m RNA在稽留流產(chǎn)組患者絨毛組織中相對表達(dá)量為1.77±0.15,正常早孕組中為2.48±0.19,稽留流產(chǎn)組絨毛組織中VEGF m RNA表達(dá)量低于正常早孕組,差異具有顯著性(PO.05)。2.HE染色結(jié)果2.1正常早孕組:胎盤絨毛形態(tài)規(guī)則,大小一致,外層合體滋養(yǎng)細(xì)胞和內(nèi)層細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞細(xì)胞之間彼此互相嵌緊呈磚砌狀,排列整齊,胞質(zhì)豐富,并且邊界清晰,絨毛間質(zhì)無水腫樣改變,其中絨毛間質(zhì)中可見微血管,數(shù)量較豐富,內(nèi)皮細(xì)胞較厚,并且管腔內(nèi)充滿血細(xì)胞,呈擴(kuò)張充血;2.2稽留流產(chǎn)組:胎盤絨毛形態(tài)欠規(guī)則,外層的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞數(shù)量減少,甚至斷裂消失,細(xì)胞萎縮變小并融合一起,內(nèi)層的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞可見異常增生,細(xì)胞數(shù)量增多,細(xì)胞間排列混亂,絨毛間質(zhì)可見輕微水腫或者水腫,間充質(zhì)細(xì)胞可見纖維素樣變性,絨毛內(nèi)的小血管發(fā)育不良,微血管數(shù)量減少,并且血管腔形態(tài)不規(guī)則或者無明顯管腔形態(tài),管腔內(nèi)紅細(xì)胞的數(shù)量減少,有時可見少量炎癥細(xì)胞。3.免疫組化SP檢測結(jié)果及相關(guān)性3.1 ITGA3蛋白主要表達(dá)于胞膜和胞漿中,稽留流產(chǎn)組絨毛組織中ITGA3蛋白表達(dá)量為0.23±0.04,正常早孕組為0.16±0.02,稽留流產(chǎn)組絨毛組織中ITGA3蛋白表達(dá)水平低于正常早孕組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。3.2 VEGF蛋白主要分布于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜上,稽留流產(chǎn)組絨毛組織中VEGF蛋白表達(dá)量為0.34±0.03,正常早孕組為0.45±0.03,稽留流產(chǎn)組絨毛組織中VEGF蛋白表達(dá)水平低于正常早孕組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。3.3 CD34主要陽性表達(dá)于絨毛組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞上。稽留流產(chǎn)組絨毛組織的MVD值為(20.5±6.4)個/HP,正常早孕組絨毛組織的MVD值為(32.4±5.6)個/HP,稽留流產(chǎn)組中MVD值明顯低于正常早孕組的MVD值,兩組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。3.4對免疫組化SP結(jié)果進(jìn)行Spearman相關(guān)分析顯示:在稽留流產(chǎn)患者絨毛組織中,ITGA3蛋白表達(dá)與VEGF蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r為0.456,P0.006),ITGA3蛋白表達(dá)與MVD值呈正相關(guān)(r=0.524,P0.001),VEGF蛋白表達(dá)與MVD值呈正相關(guān)(r=0.615,P0.000)。結(jié)論:1、稽留流產(chǎn)組絨毛組織中hsa-mi R-199a-5p的表達(dá)高于正常早孕組,稽留流產(chǎn)組絨毛組織中ITGA3 m RNA的表達(dá)低于正常早孕組,稽留流產(chǎn)組絨毛組織中VEGFm RNA的表達(dá)低于正常早孕組;2、稽留流產(chǎn)組絨毛組織中ITGA3蛋白的表達(dá)低于正常早孕組,稽留流產(chǎn)組絨毛組織中VEGF蛋白的表達(dá)低于正常早孕組,稽留流產(chǎn)組絨毛組織中的MVD值低于正常早孕組的MVD值;3、在稽留流產(chǎn)組絨毛組織中,ITGA3蛋白與VEGF蛋白表達(dá)呈正相關(guān),ITGA3蛋白表達(dá)與MVD值呈正相關(guān),VEGF蛋白表達(dá)與MVD值呈正相關(guān),ITGA3、VEGF低表達(dá)與稽留流產(chǎn)的絨毛血管的形成障礙有關(guān)。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R714.21
【部分圖文】：

圖 1 miRBase 軟件所示 hsa-miR-199a-5p 序列Fig 1 hsa-miR-199a-5p sequence shown by miRBase softwarbank 獲得 ITGA3 基因序列及詳細(xì)信息，ITGA3 位圖 2-3。圖 2 ITGA3 基因序列Fig 2 ITGA3 gene sequence

見圖 1。圖 1 miRBase 軟件所示 hsa-miR-199a-5p 序列Fig 1 hsa-miR-199a-5p sequence shown by miRBase software使用 Genbank 獲得 ITGA3 基因序列及詳細(xì)信息，ITGA3 位于 17 染q21.33，見圖 2-3。

圖 3 ITGA3 基因詳細(xì)信息Fig 3 The detailed information of ITGA3 gene用 Targetscan 軟件預(yù)測到 ITGA3 為 hsa-miR-199a-5p 的靶基因arget Scan（版本 7.2）軟件預(yù)測到 hsa-miR-199a-5p 和 ITGA3發(fā)現(xiàn) hsa-miR-199a-5p 與 ITGA3 的 3'端 UTR 的 395-402 位且 ITGA3 的結(jié)合序列是 5'-ACACUGGA-3（'圖 ）與 hsa-miR-分序列一致，由此說明 hsa-miR-199a-5p 能夠調(diào)控 ITGA3，兩關(guān)系。圖 4 Target Scan 軟件預(yù)測的 hsa-miR-199a-5p 和 ITGA3 結(jié)合位點及序列
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本文編號：2883392