本文關(guān)鍵詞：宮頸癌HeLa細胞分泌的PGE2抑制巨噬細胞RAW中CCL5產(chǎn)生的機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:宮頸癌是國內(nèi)外常見的婦科惡性腫瘤之一,其發(fā)病率僅次于乳腺癌,且發(fā)病有逐年上升和年輕化的趨勢。研究顯示,炎癥與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),由于腫瘤微環(huán)境中免疫抑制性因素的存在,如前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2),使得許多炎癥因子無法正常發(fā)揮作用,反而起到促瘤作用。為進一步研究宮頸癌患者中炎癥與腫瘤的關(guān)系,本實驗以培養(yǎng)宮頸癌He La細胞收集的上清液作為腫瘤條件培養(yǎng)基(tumor conditioned medium,TCM),觀察TCM是否會抑制巨噬細胞RAW中調(diào)節(jié)活化正常T細胞表達與分泌的趨化因子(regulated upon activation normal T cell expressed and secreted,RANTES/CCL5)的產(chǎn)生,這種抑制效應(yīng)是否由腫瘤條件培養(yǎng)基中的PGE2產(chǎn)生,并探討宮頸癌He La細胞分泌的PGE2對巨噬細胞中CCL5產(chǎn)生的這種抑制效應(yīng)的機制,為宮頸癌的臨床治療提供新的思路。方法:1制備腫瘤條件培養(yǎng)基(TCM):完全培養(yǎng)基培養(yǎng)對數(shù)生長期的濃度為0.6×106/ml的He La細胞,72小時后收集上清,0.45μm濾器過濾,-20℃保存,備用,即為TCM。2培養(yǎng)巨噬細胞RAW,用不同劑量(0,200,400,600μl)的TCM及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(1μg/ml)刺激RAW,觀察巨噬細胞RAW中CCL5蛋白和m RNA表達。3使用不同劑量(0,10-13,10-12,10-11,10-10 M)的PGE2及LPS(1μg/ml)刺激巨噬細胞RAW,觀察CCL5蛋白和m RNA的表達。4使用抑制劑NS-398抑制PGE2的合成后觀察巨噬細胞RAW CCL5蛋白和m RNA的表達情況。5使用PGE2的受體拮抗劑:10μM SC51322(EP1的拮抗劑),3μM AH6809(EP2的拮抗劑)和30μM AH23848(EP4的拮抗劑)及AH6809+AH23848觀察巨噬細胞的CCL5蛋白和m RNA的表達情況。結(jié)果:1使用不同劑量的TCM與LPS(1μg/ml)刺激巨噬細胞RAW后,巨噬細胞內(nèi)CCL5蛋白和m RNA的表達均會下降,且這種作用具有劑量依賴性。LPS刺激前后,CCL5的表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。LPS+TCM共刺激與LPS單獨刺激相比,CCL5的表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2用不同劑量的PGE2及LPS(1μg/ml)刺激巨噬細胞RAW,CCL5蛋白和m RNA的表達均會下降。PGE2的不同劑量組與LPS單獨刺激相比,CCL5的表達差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3用PGE2的抑制劑NS-398加入He La中制備TCM,用后者刺激巨噬細胞RAW后,CCL5蛋白和m RNA的表達抑制被逆轉(zhuǎn),提示PEG2是TCM的重要成分,且其在CCL5的表達上發(fā)揮著重要的負向調(diào)節(jié)作用。4用PGE2的受體拮抗劑:10μM SC51322(EP1的拮抗劑),3μM AH6809(EP2的拮抗劑),30μM AH23848(EP4的拮抗劑)及AH6809+AH23848刺激巨噬細胞RAW觀察CCL5蛋白和m RNA的表達情況:SC51322對CCL5蛋白和m RNA的表達無影響;AH6809和AH23848均會部分逆轉(zhuǎn)PGE2對CCL5蛋白和m RNA的表達的抑制效應(yīng);聯(lián)合AH6809+AH23848則會完全逆轉(zhuǎn)PGE2對CCL5蛋白和m RNA的表達的抑制效應(yīng)。Med(培養(yǎng)基,medium)與LPS、LPS與LPS+TCM、LPS+TCM與LPS+TCM+AH6809、LPS+TCM與LPS+TCM+AH23848、LPS+TCM與LPS+TCM+AH6809+AH23848相比,CCL5的表達差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:腫瘤條件培養(yǎng)基TCM即培養(yǎng)宮頸癌He La細胞制備所得,抑制巨噬細胞RAW中CCL5蛋白和m RNA的表達。根據(jù)研究這種抑制效應(yīng)是由PGE2產(chǎn)生,在實驗中使用不同劑量的PGE2刺激巨噬細胞RAW后,同樣會抑制巨噬細胞RAW中CCL5蛋白和m RNA的表達,為進一步明確這種抑制效應(yīng)來源于PGE2,在實驗中使用PGE2的抑制劑NS-398即可阻斷PGE2的產(chǎn)生及PGE2受體拮抗劑可逆轉(zhuǎn)這種抑制效應(yīng),這一結(jié)果提示我們宮頸癌He La細胞分泌的PGE2會抑制巨噬細胞RAW中CCL5產(chǎn)生。
【關(guān)鍵詞】：宮頸癌 HeLa細胞 巨噬細胞RAW TCM PGE2 CCL5
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-17
• 結(jié)果17-19
• 附圖19-22
• 附表22-24
• 討論24-26
• 結(jié)論26
• 參考文獻26-29
• 綜述 腫瘤免疫抑制微環(huán)境的研究29-41
• 參考文獻35-41
• 致謝41-42
• 個人簡歷42

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4 李，

本文編號：286973