本文關(guān)鍵詞：探討人卵巢組織玻璃化凍存及卵母細(xì)胞的獲取，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:玻璃化冷凍是一種快速、簡(jiǎn)易、經(jīng)濟(jì)的凍存卵巢組織方法,對(duì)人類和動(dòng)物卵巢組織凍存具有很大前景,由于卵巢組織不同于胚胎和卵母細(xì)胞,所以其凍存方法有很大改善空間。目前唯一可靠評(píng)價(jià)冷凍效果的是臨床妊娠率和出生率,改善玻璃化冷凍方法的最好方式為針對(duì)冷凍方案中單因素逐步改進(jìn),本研究在僅改變一個(gè)參數(shù)的基礎(chǔ)上,選擇出最適合卵巢組織玻璃化凍存的冷凍保護(hù)劑濃度,并在此基礎(chǔ)上獲取未成熟卵母細(xì)胞行成熟培養(yǎng),作為不宜行卵巢刺激及不可延誤進(jìn)一步治療的女性保留生育力的最佳手段。材料與方法:收集40例2014年3月~9月因卵巢良性腫物行手術(shù)者,取其剝離的卵巢囊腫壁上殘留卵巢組織共40片,利用患者手術(shù)切除的廢棄組織進(jìn)行研究。切割卵巢皮質(zhì)前使用22號(hào)針頭+5ml注射器吸取可見卵泡,將吸取液注入卵母細(xì)胞洗滌液GMOPS中,余各組卵巢組織切割成大小1mm×1mm×5mm的卵巢皮質(zhì)塊,各組隨機(jī)取其中8塊,按玻璃化冷凍液不同濃度隨機(jī)分為4組,玻璃化冷凍組3組,另一組為對(duì)照組(新鮮組)。獲取的未成熟卵母細(xì)胞置于含培養(yǎng)液的四孔皿中,放于37℃含5%CO2高濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后,分離成熟卵母細(xì)胞行玻璃化冷凍存于液氮中。新鮮對(duì)照組的卵巢皮質(zhì)塊行10%中性福爾馬林固定待用。3組玻璃化冷凍組皮質(zhì)塊以篩網(wǎng)為載體分別經(jīng)3種不同濃度冷凍液處理后放入液氮中保存一周后解凍,經(jīng)10%中性福爾馬林固定后行HE染色及免疫組化標(biāo)記,分析比較3組玻璃化冷凍組與新鮮對(duì)照組凍融前后卵泡形態(tài)學(xué)變化、細(xì)胞增殖及凋亡程度,并判定計(jì)數(shù)成熟卵母細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果:1.卵巢組織形態(tài)學(xué)評(píng)估及計(jì)數(shù)各級(jí)卵泡數(shù)量CPA1與對(duì)照組比較各級(jí)卵泡數(shù)量,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3組玻璃化冷凍組,無論哪種冷凍方法復(fù)蘇后對(duì)卵巢組織始基卵泡影響均不明顯,但可見卵巢組織內(nèi)部分間質(zhì)細(xì)胞排列紊亂、疏松甚至出現(xiàn)分離。2.免疫組化結(jié)果比較計(jì)數(shù)每10個(gè)高倍視野陽性細(xì)胞數(shù),玻璃化冷凍組與對(duì)照組比較,僅CPA1組卵巢組織中各級(jí)卵泡卵母細(xì)胞及顆粒細(xì)胞中Ki-67表達(dá)與對(duì)照組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.Tunel細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果玻璃化冷凍組與對(duì)照組始基卵泡、初級(jí)卵泡、次級(jí)卵泡內(nèi)均未見凋亡細(xì)胞,僅部分間質(zhì)細(xì)胞核、血管內(nèi)皮細(xì)胞核內(nèi)可見凋亡顆粒。4.玻璃化凍存卵母細(xì)胞數(shù)量未成熟卵泡來自于12例病人卵巢皮質(zhì),成熟培養(yǎng)后其平均成熟率為82.7%,共20枚成熟卵母細(xì)胞經(jīng)玻璃化凍存。結(jié)論:1.采用DMSO與EG低濃度配伍組無論是光鏡下卵泡形態(tài),細(xì)胞增殖活性還是細(xì)胞凋亡程度均與對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,明顯優(yōu)于高濃度組及PROH聯(lián)合EG組。2.對(duì)于不宜行卵巢刺激及不可延誤進(jìn)一步治療的女性,玻璃化凍存卵巢組織塊及抽取不成熟卵母細(xì)胞行體外成熟培養(yǎng)可作為該類患者保留生育能力的最佳手段。3.篩網(wǎng)作為新型冷凍載體凍存卵巢組織,推動(dòng)了卵巢組織玻璃化冷凍的新進(jìn)展。
【關(guān)鍵詞】：卵巢組織 玻璃化冷凍 冷凍保護(hù)劑 IVM Ki-67 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R714.8
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語10-11
• 前言11-13
• 研究現(xiàn)狀、成果11
• 研究目的、方法11-13
• 對(duì)象和方法13-19
• 1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象13-15
• 1.1 組織來源及處理13
• 1.2 主要試劑13-14
• 1.3 主要設(shè)備及耗材14-15
• 1.4 冷凍保護(hù)液的配備15
• 1.5 卵巢組織及卵母細(xì)胞冷凍復(fù)蘇液的配備15
• 2 實(shí)驗(yàn)方法15-18
• 2.1 未成熟卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)及玻璃化凍存15-16
• 2.1.1 未成熟卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)15-16
• 2.1.2 成熟卵母細(xì)胞玻璃化凍存16
• 2.2 分組16
• 2.3 方法16
• 2.3.1 對(duì)照組16
• 2.3.2 玻璃化冷凍組16
• 2.3.3 復(fù)蘇方法16
• 2.4 人卵巢組織冷凍復(fù)蘇效果判斷16-18
• 2.4.1 卵巢組織結(jié)構(gòu)分析16
• 2.4.2 卵母細(xì)胞成熟度判定16-17
• 2.4.3 細(xì)胞增殖活性檢測(cè)17-18
• 2.4.4 細(xì)胞凋亡檢測(cè)18
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理18-19
• 結(jié)果19-24
• 1 對(duì)照組與玻璃化冷凍組HE染色結(jié)果比較19-20
• 2 對(duì)照組與玻璃化冷凍組免疫組化結(jié)果比較20-21
• 3 對(duì)照組與玻璃化冷凍組Tunel細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果21-22
• 4 玻璃化凍存卵母細(xì)胞數(shù)量22-24
• 討論24-30
• 1 傳統(tǒng)程序化冷凍方法和玻璃化冷凍24
• 2 卵巢玻璃化冷凍的影響因素24-27
• 2.1 玻璃化冷凍液配伍及濃度25-26
• 2.2 CPA溫度26
• 2.3 逐步添加溶液26
• 2.4 卵巢組織塊大小26-27
• 2.5 玻璃化冷凍載體27
• 2.6 專業(yè)的技術(shù)27
• 3 凍融后效果檢測(cè)27-30
• 3.1 卵巢組織結(jié)構(gòu)分析27-28
• 3.2 細(xì)胞增殖活性28
• 3.3 細(xì)胞凋亡28
• 3.4 未成熟卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)28-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-35
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明35-36
• 綜述 女性腫瘤患者生育力的保存36-46
• 綜述參考文獻(xiàn)42-46
• 致謝46-47

【相似文獻(xiàn)】

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