【摘要】：近年來(lái),癌癥已成為人們關(guān)注最多的公共健康問(wèn)題,嚴(yán)重影響了人類(lèi)的健康,卵巢癌已經(jīng)為21世紀(jì)女性婦科惡性腫瘤死亡的主要原因之一。每年卵巢癌導(dǎo)致全球662000人死亡,其中大約一半患者出現(xiàn)在中國(guó)。另外卵巢癌由于起病隱匿,腫瘤位于盆腔深處,所以大部分卵巢癌患者早期不易察覺(jué),難以準(zhǔn)確識(shí)別并判斷,待出現(xiàn)機(jī)體癥狀并得到確診時(shí),己成為癌癥中晚期階段,并伴隨腹膜種植和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況。目前卵巢癌的治療手段主要有手術(shù)治療、化學(xué)治療、放射治療、生物治療等方法,但這些治療手段不僅費(fèi)用昂貴還會(huì)引起患者身體產(chǎn)生毒副作用。一氧化氮(NO)是由腫瘤、基質(zhì)和內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的多功能氣體分子,通過(guò)多種途徑在腫瘤生物學(xué)中發(fā)揮著多方面的作用機(jī)制。越來(lái)越多的證據(jù)表明,卵巢癌的生長(zhǎng)、凋亡、腫瘤基質(zhì)細(xì)胞的相互作用、血管生成和對(duì)化療的反應(yīng)等方面均有NO信號(hào)通路參與。烷基化一氧化氮類(lèi)化合物作為一種體外參與NO信號(hào)通路中促進(jìn)可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶的活性的物質(zhì),并可以促進(jìn)下游cGMP含量的產(chǎn)生,目前,還沒(méi)有系統(tǒng)的研究闡述烷基化一氧化氮類(lèi)化合物對(duì)于腫瘤細(xì)胞的增殖,遷移等方面的影響。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)研究,利用MTT法初步從三類(lèi)RNO化合物中篩選出對(duì)于卵巢癌細(xì)胞SKOV-3活力增產(chǎn)生影響并表現(xiàn)出抑制細(xì)胞活性趨勢(shì)的硝基環(huán)己烷,并以硝基環(huán)己烷作為研究考察對(duì)象,結(jié)果顯示,硝基環(huán)己烷不僅抑制卵巢癌細(xì)胞SKOV-3的細(xì)胞活性,增殖,還會(huì)引起SKOV-3細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞膜通透性增加,細(xì)胞核皺縮,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并阻滯細(xì)胞周期于G2/S期,ROS水平增加,線粒體膜電位凋亡性轉(zhuǎn)變,通過(guò)Western Blot檢測(cè)細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白PARP、cleavedPARP、Bcl2、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-8、cleaved-Caspase-9等在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況,激活Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)等。以上說(shuō)明硝基環(huán)己烷能夠引起卵巢癌細(xì)胞SKOV-3發(fā)生凋亡性轉(zhuǎn)變并顯著調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平。通過(guò)熒光實(shí)時(shí)定量PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在硝基環(huán)己烷刺激作用下,卵巢癌細(xì)胞SKOV-3遷移標(biāo)志物在mRNA水平上和蛋白水平上都收到影響,且通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)硝基環(huán)己烷對(duì)于SKOV-3細(xì)胞的遷移具有抑制作用,且隨著加藥刺激的濃度和時(shí)間的增加呈現(xiàn)出明顯的抑制作用,通過(guò)細(xì)胞劃痕以及Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)我們可以得出硝基環(huán)己烷具有可抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲的效果。通過(guò)ELISA法我們檢測(cè)到了正常卵巢上皮細(xì)胞Hesopic和卵巢癌上皮細(xì)胞SKOV-3在cGMP含量水平上的差異,并且在通過(guò)加藥處理后發(fā)現(xiàn)硝基環(huán)己烷可以一定程度上降低cGMP含量,通過(guò)Western blot法我們?cè)诘鞍姿缴蠙z測(cè)了卵巢癌細(xì)胞SKOV-3內(nèi)NO信號(hào)通路以及NOTCH信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平,并通過(guò)加藥處理得知在硝基環(huán)己烷的刺激下,NOTCH 1的蛋白表達(dá)水平下降,并且協(xié)同調(diào)節(jié)了NO信號(hào)通路中GUCY1B3蛋白表達(dá)的下降,從而調(diào)節(jié)了細(xì)胞cGMP含量的下降。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R737.31
【圖文】：

圖 2.1 不同 RNO 在不同濃度條件下對(duì)卵巢細(xì)胞存活率的影響2.4.1.2 探究在不同濃度以及作用時(shí)間下硝基環(huán)己烷對(duì) SKOV-3 細(xì)胞增殖的影響通過(guò)不同濃度的硝基環(huán)己烷分別作用于卵巢癌細(xì)胞 SKOV-3 24h、48h、72h后發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受到抑制，且呈現(xiàn)濃度和時(shí)間的依賴(lài)性。與對(duì)照組相比1)1μM、2μM、5μM 濃度組的硝基環(huán)己烷無(wú)明顯抑制作用，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；2)，10μM、12μM、15μM、20μM 濃度組的硝基環(huán)己烷均能抑制細(xì)胞增殖，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中 12μM、15μM 組具有顯著性差異，20μM 組具有極顯著差異。故取終濃度為 12μM、20μM 的硝基環(huán)己烷進(jìn)行后面一系列的實(shí)驗(yàn)，如圖 2.2。而加藥處理時(shí)間方面，1）24h 各組間的生存率有顯著差異；2）48h 各組間的生存率有均有極顯著差異；3）72h 各組間的生存率均有極顯著差異如圖 2.3。

不同濃度的硝基環(huán)己烷作用于卵巢癌細(xì)胞SKOV-324h的增殖抑制檢測(cè)

不同濃度硝基環(huán)己烷作用于SKOV-3細(xì)胞24h、48h、72h后細(xì)胞存活率

【參考文獻(xiàn)】

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1 李素紅;王鋒;王慧芬;付秀虹;廖予妹;;血清HE4、CA125聯(lián)合檢測(cè)鑒別盆腔腫塊患者卵巢癌的診斷價(jià)值[J];中國(guó)婦幼保健;2012年24期

2 周t

本文編號(hào)：2794700