【摘要】：研究背景:多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育齡女性最常見的生殖內(nèi)分泌紊亂綜合征,發(fā)病率為5%-10%。PCOS的病因尚不清楚,目前認(rèn)為主要與遺傳及環(huán)境相關(guān),以卵巢內(nèi)持續(xù)存在卵泡發(fā)育成熟障礙為特征。PCOS具有異質(zhì)性,其病理改變十分復(fù)雜,包括竇狀卵泡發(fā)育異常、顆粒細(xì)胞增生凋亡、卵泡膜細(xì)胞過(guò)度增生、高雄激素血癥及慢性排卵障礙等。卵巢中卵泡的發(fā)育過(guò)程主要包括有效卵泡的生長(zhǎng),顆粒細(xì)胞的增殖分化,卵泡基底層擴(kuò)張,最后,卵泡液在卵泡竇中的形成。人卵泡液能為卵母細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育提供重要的微環(huán)境,其中包含許多物質(zhì),包括蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物、離子化合物,與卵子的成熟過(guò)程和質(zhì)量息息相關(guān)。最新研究發(fā)現(xiàn)人卵泡液中不僅含有上述物質(zhì),還含有微小RNA(microRNA,miRNA)。miRNA是一類長(zhǎng)約19-26個(gè)核苷酸的單鏈非編碼RNA,參與基因的轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控,能與靶mRNA的3’UTR區(qū)結(jié)合,負(fù)向調(diào)控其表達(dá)。miRNA參與各種各樣的調(diào)節(jié)途徑,與多種疾病相關(guān),如癌癥、代謝性疾病等。除此之外,miRNA還廣泛參與女性卵泡發(fā)育成熟、受精、著床及早期胚胎發(fā)育等過(guò)程,對(duì)維持女性正常生育功能起著不可替代的作用。目前對(duì)PCOS患者卵泡液中的miRNA研究較少,因此,我們旨在探究PCOS患者卵泡液中有哪些miRNA表達(dá)存在異常,這些表達(dá)異常的miRNA在PCOS疾病的發(fā)生發(fā)展中起了何種重要作用。目的:1.探索PCOS患者卵泡液中差異表達(dá)的miRNAs。2.探討差異表達(dá)的miRNAs在PCOS發(fā)病機(jī)制中所起的作用,如顆粒細(xì)胞功能障礙或卵泡形成異常。方法:首先收集在上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院生殖中心行IVF/ICSI助孕的PCOS患者和對(duì)照組患者的卵泡液,利用miRNA高通量測(cè)序找出差異表達(dá)的miRNAs,通過(guò)定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)驗(yàn)證測(cè)序結(jié)果。然后使用生物信息學(xué)分析軟件,鑒定差異表達(dá)的miRNA的生物學(xué)功能、相關(guān)信號(hào)通路及其可能的靶基因。最后,采用Western blot、體外細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染、雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)和細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8(CCK-8)驗(yàn)證miR-335-5p的靶基因及miR-335-5p對(duì)顆粒細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果:兩組共有19個(gè)miRNAs差異表達(dá),PCOS組中3個(gè)miRNAs上調(diào),16個(gè)miRNAs下調(diào);qRT-PCR證實(shí)PCOS組卵泡液和顆粒細(xì)胞中miR-335-5p表達(dá)顯著降低(P0.01);卵泡液中miR-335-5p的表達(dá)水平與竇卵泡計(jì)數(shù)、抗苗勒管激素和總睪酮呈顯著負(fù)相關(guān)(ρ=-0.623,P=0.001;ρ=0.570,P=0.01,ρ=-0.708,P=0.001)。血清/糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)激酶家族成員3(SGK3)是miR-335-5p的靶基因;PCOS組SGK3的mRNA和蛋白水平均顯著高于對(duì)照組(P0.05);miR-335-5p mimic可以抑制KGN細(xì)胞增殖,并降低Akt和mTOR的磷酸化水平。結(jié)論:在PCOS患者中,卵泡液中低表達(dá)的miR-335-5p和內(nèi)分泌異常有關(guān);低表達(dá)的miR-335-5p可通過(guò)上調(diào)SGK3表達(dá)使顆粒細(xì)胞過(guò)度增殖,其作用機(jī)制與PI3K-Akt-mTOR信號(hào)通路有關(guān),這可能導(dǎo)致PCOS卵泡過(guò)度募集及成熟障礙,本研究為改善PCOS顆粒細(xì)胞功能障礙提供了新的分子靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R711.75
【圖文】：

注：對(duì)miR-335-5p進(jìn)一步信息分析，得到圖1-5，圖左顯示的是相關(guān)KEGG Pathway分析；圖右顯示的是相關(guān)基因功能的GO分析。圖1-5 miR-335-5p mRNA網(wǎng)絡(luò)圖Figure 1-5 miR-335-5p mRNA network analysis1.4 討論miRNA在人類中主要定位于染色體（除Y染色體以外）的內(nèi)含子區(qū)域，可通過(guò)調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄后水平，調(diào)節(jié)細(xì)胞基本的生理過(guò)程，如細(xì)胞發(fā)育、分化、增殖和凋亡[29]。在本文緒論中我們提到miRNA在女性生殖系統(tǒng)中起著重要作用[25]。miRNA與卵巢卵泡發(fā)育、卵巢功能紊亂及卵巢功能早衰等疾病密切相關(guān)[30]。在

【參考文獻(xiàn)】

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1 程佳;楊曉龍;尚素霜;張?zhí)旎?趙民;高麗杰;于華;;卵巢上皮性癌組織中磷酸化蛋白激酶B的表達(dá)及意義[J];河北醫(yī)藥;2013年12期

本文編號(hào)：2775487